概述II关于核酸检测试剂中的内对照

序

内

对

照

· 为避免标本采集、核酸提取和PCR反应过程可能产生的假阴性结果，核酸检测试剂通常包含内对照，内对照在实时荧光PCR反应体系中和靶核酸同时完成扩增反应，如果内对照无扩增曲线，则提示实验环节存在问题，该标本实验无效。

内对照分为两类：内源性内标和外源性内标。

· 接下来，以SARS-CoV-2核酸检测试剂中的内对照为例进行概述。

内源性内标

内源性内标，常采用的是样本中固有的人体细胞中的管家基因，如RNase P等人源基因，这些基因在人体各器官组织细胞中普遍存在，存在于采集的咽拭子等标本中，因此可以检测是否采集到了上皮细胞及整个实验操作过程的准确性，由于人基因组和病毒提取效率存在一定差别，内源性内标无法完全监测提取过程中存在的问题。

优势

· 既可以监测是否采集到的足够量的样本细胞，又可以监测提取和扩增检测过程。

劣势

· 由于人基因组和病毒提取效率存在一定差别，内源性内标无法完全监测提取过程中存在的问题（扩增效率或者扩增抑制等）。

· 如果样本为口腔液等样品时，管家基因的量低可能会导致实验不成立；如果待检测的样本是环境样本时，则内源性内标基因完全失效。

外源性内标

外源性内标，常用的是MS2噬菌体等假病毒，在临床标本制备前加入，然后与标本中的靶核酸一起经历核酸提取过程，可以较全面地监测从核酸提取到产物分析全过程的有效性。外源性内标不但可以监测标本中PCR抑制物及核酸提取中试剂的混入所致的假阴性外，而且还可以监测因为PCR扩增仪孔位间温度的不准确及核酸的提取效率太低所致的假阴性。

与内源性人源基因相比，外源性内对照不能监控标本采集的质量，需要提前制备并作为试剂盒的一个组分。

优势

· 更好的反映核酸提取及扩增检测过程（外源性内标的假病毒与真实病毒模板在基因序列上相近，因此扩增效率相近）。

· 是对临床样本中可能存在的抑制/干扰物的质控措施。

劣势

·不能监测是否采集到足量的细胞样本，存在竞争抑制的可能。

内标设置是为了避免“假阴性”的出现，监控整个反应过程是否顺利进行，无论内源性内标还是外源性内标都可以满足。

参考资料：《实时荧光PCR技术》《新型冠状病毒感染临床检测技术》