浅析新型冠状病毒德尔塔变异株室间质评结果

新冠疫情防控，核酸检测是关键的环节，也是早期发现、早期隔离、早期治疗及疗效评估的重要实验依据。故此，各级医疗机构对于新冠核酸检测均严格规范管理，力求结果精准。尤其是德尔塔变异株的出现与流行后，全国各地新冠防控更加注重、依赖新冠核酸检测的结果。

国家卫生健康委临床检验中心于2021年07月29日，应急开展2021年全国新型冠状病毒德尔塔变异株核酸检测室间质量评价，目的在于了解全国各新型冠状病毒核酸检测实验室对德尔塔变异株的检测质量，保证新冠病毒核酸检测在疫情防控中的有效性。

让我们担忧的是，在参加的8127家实验室中，有 100 家实验室不合格，合格率仅为98.77%。从占比前五的检测试剂来看，均有一定的不符合率。

如何看待这次质评结果？

此次质评样本，除4号为阴性标本外，2号非变异株，1、4、5号样本为德尔塔变异株，其病毒载量均为临界或弱阳性状态（通常核酸检测下限为5.0E+02copied/ml）。这样的设置模式试图通过评价标本检测灵敏度与特异性，来反映整个实验室的核酸检测能力。

按常理而言，核酸检测试剂均经过国家相关部门审核批准；检测人员在经历2020年度新冠防控后，均经过严格的培训；所有检验设备均为合格且已长期应用于核酸扩增检测，似乎不应该出现假阴性结果。而事实上出现了1.23%假阴性，且样本中病毒载量越接近检测下限，假阴性率越高。

那么，造成检测假阴性的原因有哪些呢？作为我院核酸主要检测团队，我们认真分析了整个操作流程，对于假阴性结果进行如下剖析。

1.质控品复溶欠佳

临检中心室间质评多为干粉样本，在复溶过程中，若混匀程度不够或溶解不充分，病毒在样本中会呈不均一分布，这样会产生取样误差引起病毒漏检。

2.试剂配制批内差异  

大批量反应试剂配制过程中，若反应体系添加不当，或者各种成分添加后未充分混匀即进行分装，会造成批内差异，引起检测误差。

3.试剂配制后存放时间过久 

在日常进行新冠核酸检测过程中，我们观察到，试剂配制后，若长时间存放（超过3天以上），会导致检测Ct值增加。对于弱阳性标本而言，会造成假阴性结果出现。

4.核酸提取仪提取效率降低  

大规模核酸筛检时，所用仪器设备往往会超负荷运转，若未及时保养维护，更换耗材，在进行核酸提取时，提取的效率会显著降低。此外，若核酸提取试剂与提取仪非完全匹配，也会造成提取效率降低，这些也是造成假阴性的常见原因。

5.核酸模板加样误差  

加样枪的校准是必要的，也是分子检测实验室常规的工作，其意义即为保证核酸模板加样的精准性。若此项工作未很好完成造成加样误差，也会产生假阴性结果。

6.扩增仪孔温度异常  

在大规模筛检时期，PCR扩增仪24小时运转是屡见不鲜的事情。若未对设备及时保养维护，部分反应孔会出现温度异常或升降温异常。若在这样的孔内进行扩增反应，出现异常结果是难免的。

7.八联管封闭不严

在加样过程中，若八联管管帽加盖不严，在扩增过程中，反应体系中的水分会挥发，导致各种成分浓度异常，也会造成扩增结果假阴性。

从国家卫健委临床检验中心发布的结果上看，4号质控样本本为阴性结果，但也有阳性报告，尽管只有0.27%，但是提示我们若无严格的审核、复检管理规范，假阳性的结果也会出现。究其原因，应该与阳性对照加样时因操作不当造成的管间污染有关。而大规模的实验室严重污染可能性较小。我们必须关注并及时核查这样的结果，否则会造成极为严重的后果。

总之，加强实验室管理，严格规范性操作，是保证检验结果准确的关键。我们应当做好新冠核酸检测各个环节的质控工作，力求检验结果及时、准确、可靠，为疫情有效防控做出检验人的应有的贡献。

来源：德安实验诊断