文献解读 | CIRC_0006332通过miR-143调节MYBL 2的表达促进膀胱癌的生长和进展
论文：Circ_0006332 promotes growth and progression of bladder cancer by modulating MYBL2 expression via miR-143（CIRC_0006332通过miR-143调节MYBL 2的表达促进膀胱癌的生长和进展）
摘要
在本研究中，我们分析了循环RNA在膀胱癌生长和发展中的作用。直接测序和定量RT-PCR分析表明，CIRC 0006332在膀胱癌组织中明显上调.测序分析表明，中国保监会0006332是通过剪接第8和第9外显子而产生的。
MYBL 2成绩单。荧光原地杂交分析表明，CIRC 0006332定位于膀胱癌细胞胞浆。双荧光素酶报告试验表明，miR-143与中国保监会0006332和MYBL 2的3‘UTR特异性结合。
CIRC 006332在膀胱癌患者中的高表达与肿瘤淋巴结转移及肌层浸润有关。CIRC 0006332基因敲除膀胱癌细胞后，细胞增殖、集落形成和侵袭能力下降。
CIRC_(0006332)基因敲除提高了E-钙粘蛋白水平，降低了Vimentin、CCNB 1和P21蛋白的表达。提示CIRC 0006332促进上皮间充质转化和细胞周期进程。体内裸鼠实验表明，CIRC_(0006332)敲除膀胱癌细胞形成的肿瘤明显小于对照组。
我们的研究表明，CIRC 0006332通过作为miR-143的海绵来调节MYBL 2的表达，从而促进膀胱癌的生长和发展。因此，CIRC_0006332是膀胱癌的早期诊断指标。
在膀胱癌组织中的表达
通过整个转录组序列分析，我们鉴定出3377个圆环RNA转录子，包括1340个上调和1844个下调的转录产物。其中279份圆环RNA转录本差异表达，其中上调48份，下调231份。
分层聚类分析显示癌组织和癌旁正常组织之间有明显的圆环RNA表达。我们选择了前10位调控异常的转录子，包括5种上调和5种下调的转录本进行进一步分析。
膀胱癌组织中CIRC_0087138、CIRC_00018069、CIRC_0006332和CIRC_0001495表达异常。测序分析表明，crc 0006332是通过剪接在MYBL 2膀胱癌组织中转录和显著上调。因此，我们选择了中国保监会0006332作为进一步研究的对象。
基本特点及临床意义
中国保监会_0006332的长度为554个核苷酸，由第8外显子和第9外显子之间的剪接而产生。MYBL 2谈话全文。琼脂糖凝胶电泳显示，中国保监会0006332对外切酶具有抗性，而线性。
MYBL 2MRNA敏感，由外切酶。荧光原地杂交(FISH)显示crc_0006332定位于T24和UM-UC-3细胞的胞质中。对32例膀胱癌及癌旁正常组织的qRT-PCR分析表明，CIRC_(0006332)在膀胱癌组织中明显上调(P<0.01)。
与癌旁正常膀胱组织相比，膀胱癌组织MYBL 2 mRNA水平显著升高(P<0.05)。中国保监会0006332和MYBL 2曲线下面积分别为0.860和0.885。
从而证明了它们作为膀胱癌早期诊断标志物的潜力。CIRC 0006332的表达与肿瘤淋巴结转移(TNM)分期及肌肉浸润有关(P<0.05)。
基因敲除对膀胱癌增殖和侵袭的抑制
用CIRC_0006332特异性siRNA抑制T24和UM-UC-3细胞中CIRC_0006332的表达.细胞计数试剂盒-8(CCK-8)结果显示，中国保监会0006332基因敲除后，T24和UM-UC-3细胞的存活率明显低于对照组(P<0.05)。
EDU(5-乙炔基-2‘-脱氧尿苷)分析表明，crc 0006332基因敲除后，循环细胞或细胞数量明显减少。CIRC_(0006332)基因敲除T24和UM-UC-3细胞的集落大小和数量明显低于阴性对照组(P<0.05)。
Transwell细胞侵袭试验显示，crc_0006332基因敲除后，T24和UM-UC-3细胞的侵袭力明显降低(P<0.01)。提示中国保监会0006332对膀胱癌细胞的增殖和侵袭能力有促进作用。
海绵状miR-143增加MYBL 2的表达
QRT-PCR结果表明，CIRC_0006332在膀胱癌组织和6个细胞系(5637，T24，J82，UM-UC-3，TSCCUP和SV-Huc-1)中的表达与MYBL 2的表达呈正相关。
SiRNA基因敲除CIRC_0006332可显著降低MYBL 2的表达。而中国保监会_0006332的过度表达显著增加膀胱癌细胞株T24和UM-UC-3中MYBL 2的表达。
同时，抗中国保监会0006332的siRNA-1和siRNA-2对MYBL 2的表达无明显影响。迪克尔击倒显著降低中国保监会0006332对MYBL 2表达的调节能力。
这表明中国保监会0006332通过海绵调控的miRNAs促进MYBL 2的表达。我们发现中国保监会0006332和MYBL 2与miR-143、miR-423-5p、miR-665和miR-1182具有共同的潜在结合位点。
荧光素酶报告分析结果表明，miR-143与中国保监会0006332。基于miRway和CircInteractome的预测，crc_0006332有两个潜在的miR-143结合位点，它与miR-143共定位于膀胱癌细胞胞浆。
中国保监会0006332基因敲除显著降低miR-143的表达。此外，irc_0006332 siRNA和miR-143抑制剂的共转染增加了集落的数量和大小。
DNA合成，以及细胞的侵袭性膀胱癌细胞株与只转染CIRC_0006332 siRNA的细胞进行比较。提示中国保监会0006332可通过海绵状miR-143在膀胱癌细胞中增加MYBL 2的RNA表达。
讨论
在大多数肿瘤中，miR-143起抑癌作用。在结直肠癌细胞中，miR-143通过降低MMP 7的表达而抑制细胞增殖。此外，miR-143抑制食管鳞状细胞癌的细胞增殖、侵袭和上皮间充质转化。
MIR-143还通过靶向环氧合酶-2来抑制膀胱癌细胞的生长和迁移。我们用双荧光素酶报告试验证明miR-143通过与其3‘UTR结合来抑制MYBL 2的表达。
这些结果提示中国保监会0006332作为miR-143的海绵，通过靶向MYBL 2抑制膀胱癌细胞的增殖和侵袭。MYBL 2曾被报道能促进EMT和细胞周期的进展。
在我们的研究中，我们证明敲除CIRC_0006332增加了E-钙粘蛋白的表达，降低了Vimentin、P21和CCNB 1的表达。提示中国保监会0006332能促进膀胱癌细胞的EMT和细胞周期的发展。
总之，我们的研究表明，中国保监会0006332通过作为miR-143海绵增加MYBL 2的表达，并促进膀胱癌的增殖和侵袭。我们推测，中国保监会0006332是一个潜在的诊断性膀胱癌的生物标志物。
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