技术达人精品课20171122-王华【Q&A】 / 开普饭

稳

王老师，请问盐酸分化时会不会把DNA与正电铝离子分化掉呢，时间怎样把握呢？

王华

盐酸分化会对铝离子与DNA的配位键具有解离作用，解离的程度与盐酸的浓度和反应时间有关。盐酸浓度越高，解离的速度越快；反应时间越长，解离的数量越多。所以分化的程度的掌控是影响你的HE切片苏木素深浅的重要因素。

朱进玲

在组织固定方面，第三方检验中心会面临2大问题:1.送检组织固定液并不都是中性福尔马林，有的用福尔马林，有的用95酒精固定，甚至有的不固定。2.大组织有些不剖开固定，且固定液的量往往达不到组织体积的8倍以上。这种情况会不会使苏木素比较难上色？用harris苏木素15分钟，碳酸锂10分钟还是不够蓝，有些大组织细胞核还是发紫发灰，请问如何改变这种组织的染色尼？谢谢王老师

王华

您提到的组织固定的问题，不光是第三方检验中心出现的问题，很多病理科也存在组织固定的问题。可能是第三方检验中心这个问题更明显，解决起来更棘手。

可以明确的是组织固定不良是会影响HE染色的，但不同的原因导致的染色变化表现是不一样的。不及时固定、不剖开固定或固定液不足就会引起组织自溶，导致蛋白和核酸降解，HE染色浅淡；使用不同的非中性缓冲甲醛固定液，对染色也有影响，但呈现的染色效果会不太一样。

固定不好而导致的染色不良，通过个性化的调整染色流程，是治标不治本的手段，您需要想办法解决固定合格率的问题。比如把固定不好的病理记录下来，出现什么后果，对患者的检测造成了什么影响，再对各个医院的情况统一整理数据，与合作医院去反映和沟通，以期解决固定质量问题。

然然

王老师，您好，我想问的题，常规的片子核内总会有核内假包涵体，是怎么回事？要从哪些方面着手解决呢？

王华

我不能确定你说的“核内假包涵体”是个怎样的形态结构。我没看到您所说的“核内假包涵体”具体是什么模样的，所以不能随便推测原因，怕误导您。您可以加我微信，把图像发过来，我先看看再讨论这个问题。

稳

王老师我还想问:现在天气冷了，脱蜡剂可以用烤箱稍微烤热吗？因为我平时做加快为了快就会稍加热（TO）脱蜡剂

王华

使用TO作为脱蜡剂，在冬天气温低的情况下的确是影响脱蜡速度。可以适当提高温度提高脱蜡的速度。但建议控制加热的温度，温度过高TO也是会挥发增大，于空气环境安全和操作者安全有影响。

朱进玲

王老师讲到用冰醋酸调节苏木素的PH值，那PH值有个具体范围吗？了解到ph值是在2.2-2.5，这跟您讲的一致吗？另外还想问gill型苏木素相对harris和mayer苏木素的区别？谢谢

王华

乙酸在水溶液中是一元弱酸，酸度系数为4.8，pKa=4.75（25℃），浓度为1mol/L（约6%质量浓度）的醋酸溶液的pH为2.4（冰乙酸详细的性状可以自行百度，或查阅有机化学乙酸相关内容）。

另：根据我在直播课程中的内容，从氧化剂种类、氧化剂与苏木色精的质量比、配制方法、添加冰乙酸及甘油与否等方面，自己比较一下你提到的这几个苏木素染色液的区别。我是“授之以渔”，“鱼”得您自己捉。

小丽

王老师，平时配苏木素的时候都是在最后加入冰醋酸，我以为是终止氧化的，难道只有调节等电点么？

王华

加入冰乙酸是调节苏木素染液的pH值，降低染液的等电点。

冰乙酸不能终止氧化反应。

语嫣

王老师您好，配苏木素最后加碘酸钠，是等溶液冷却后再加吗？谢谢

王华

是的，等苏木色精和硫酸铝钾的混合溶液温度降到室温再加碘酸钠，搅拌至碘酸钠溶解，静置4~12小时，再加冰乙酸和甘油等试剂。

云

王老师，您好，我们这是自己配苏木素，用氧化汞氧化，开始染色时没有氧化膜，用一段时间后氧化膜越来越多，然后越来越少，这是说明试剂的染力由弱变强再变弱吗？谢谢

王华

氧化膜是一种染液表面的氧化苏木精被空气中的氧被进一步氧化而产生的聚合物。在没有添加甘油等“稳定剂”的情况下，氧化膜与染液中的苏木色精的一级氧化物（苏木红）的量成正相关，可以作为衡量染液染色力强弱的初略判断。但氧化膜的形成很“讨厌”，每次使用都要清理染液表面的氧化膜，很麻烦，所以一般都采取加入一定量的甘油抑制氧化膜和染液内部苏木素沉淀的形成。

塞翁失马

老师，我们HE染完以后，间隔几年后有退色是什么原因？这次我们病理科质控就因为退色而扣分。

王华

HE染色切片出现褪色的现象，在很多病理科都发现，但是原因都各有不同，而且原因也很隐蔽。HE染色中各类试剂的选用、染色流程中的水洗程度、封片剂的种类都会影响HE切片中颜色的持久度。

因为您没有提供给我您科室的细节，所以我也不能准确的推断您的科室到底是什么因素导致了HE切片的褪色现象。

机器染色，推荐使用兰化液反蓝还是流水反蓝

王华

因为很多机器染色的流水都是常温状态，用流水返蓝的会需要比较长的时间，如果您的科室不赶时间，苏木素染色之后流水冲洗10~20分钟也是不错的选择（前提是您科室的自来水不偏酸）。

如果赶时间，就用返蓝液返蓝，但需要注意返蓝之后充分流水冲洗，以免影响后续的伊红染色效果（流水冲洗时间建议不短于5分钟），返蓝液残留亦会引起切片在后期存档过程中伊红褪色现象。

江苏省网友

王老师，请问苏木素和伊红的选择和配制方法，谢谢

王华