蛋白酵母分泌表达步骤与周期

步骤服务内容周期酵母表达载体亚克隆*密码子优化，基因合成(或客户提供质粒模板：目的基因扩增)*将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上，可提供表达载体，如pPICZaA 、pGAPZaA、pPIC9K*拼接序列验证：测序*交付：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序原始报告1-2周酵母表达菌株转化*可提供表达菌株：X33，GS115，酿酒酵母等。*扩增培养5-10个阳性克隆并进行重组蛋白诱导表达*SDS-PAGE交付：阳性克隆菌株及表达筛选结果报告。2周酵母表达菌株筛选*检测重组蛋白表达情况（适用于多拷贝数和高表达菌株）*交付：阳性克隆菌株及表达筛选结果报告。2周酵母表达菌株表达优化对挑选出来的单克隆菌株，优化培养及诱导条件（培养基，菌体密度，甲醇浓度，诱导时间等），提高目标蛋白的表达量2周小规模蛋白表达及纯化*1L发酵液通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。*SDS-PAGE交付：重组蛋白0.02-3mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度>85%。2-3周大规模蛋白表达及纯化10L，30L，80L,130L,500L发酵规模增值服务*通过HPLC，质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。*蛋白质N端测序：PPSQ31（Edman降解法测序仪）1-2周