不知道怎么选抗体？今天手把手教你选抗体

当你决定要买一支抗体，是否问过自己以下问题：我要买哪个牌子？靶标和种属是什么？克隆类型是什么？宿主是什么？标记物是什么？要用于哪些实验？

这些基本条件清晰明了，才能选到合适的抗体，早日得到完美的实验结果哦。

那么今天我们就来一起走一遍完整的抗体选择流程吧~

第一步：如何找到抗体主页

直接登陆Thermo Fisher Scientific 官网的抗体主页：

www.thermofisher.com/antibodies ，界面最上方就是我们的贴心小助手—抗体检索工具。

第二步：充分利用检索工具

●查找一抗(Primary antibodies)

第一格：选择“一抗” （primary antibodies）

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第二格：可输入靶标名称/基因类型/抗原名称(Target, gene symbol, antigen)

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第三格：选择具体的实验应用(Application)，例如WB/IF/IHC/ICC/ELISA/FACS等

Tip：不同的实验对抗体的要求是不同的，一种抗体也有可能适用于多种用途。例如适用于Western Blot（WB）的抗体多数也适用于Dot blot、免疫组化（IHC）实验，因为都是用来检测变性的线性抗原；适用于ELISA的抗体多数也适用于免疫荧光（IF/ICC）、IP/Co-IP，因为都是用来检测天然构象抗原；然而适用于WB的抗体，不一定适用于IF/IP等实验，因此挑选抗体的时候一定要确认具体的实验用途。

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第四格：选择要检测目标物种(Target Species)，例如Human/Mouse/Rat/Rabbit等

Tip：弄清我们要检测的样品是来源于哪个种属，才能又快又准地拿到理想的结果哦。如果样品来源于human，却选择了针对mouse的抗体，可能会在一次次重复也得不到理想结果的过程中浪费时间精力和经费甚至开始怀疑自己…

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各项条件都设定好啦，点击右侧的搜索键，就可以跳转到筛选后的抗体界面啦。

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这里有更加精准的筛选条件哦，我们来看看它们都代表了什么吧：

偶联物（Conjugate）：我们也可以称作“标记物”、“染料”。根据不同实验要求，可以选择未标记一抗（Unconjugated）或直标一抗（荧光染料Alexa Fluor/FITC，生物素Biotin、辣根过氧化物酶HRP、碱性磷酸酶AP等）。

宿主（Host）：宿主是指帮我们生产抗体的物种，例如小鼠（mouse）、大鼠（Rat）、兔子（Rabbit）等，不同host类型，决定后续二抗的选择。例如mouse anti-human一抗，是指借助小鼠生产出来的抗体，用于检测人源样品，那么就要搭配anti-mouse的二抗。此外还需要注意：所用二抗的宿主必须不同于一抗的宿主和目标种属。例如，如果一抗来源于兔，则不能使用来源于兔的二抗。

克隆性（Clonality）：也就是“克隆类型”，我们需要的是单克隆抗体（monoclonal）还是多克隆抗体（polyclonal）呢？单抗更适用于检测单个表位，且批次间一致性高，不同实验间同质性也非常高，然而可能出现特异性过强或表位丢失的现象；多抗则可以识别任一抗原上的多个表位，比单抗更能容许抗原的微小变化，更适用于检测变性蛋白质，不足之处是易产生批次间差异及背景信号。

修饰位点（PTM- post translation modification）: 常规的修饰类型有乙酰化（Acetylation）、甲基化（Methylation）、磷酸化（Phosphorylated）等。

克隆（Clone）：即“克隆号”，一般是用来标示单克隆抗体的抗原表位的，克隆号一致的抗体，抗原表位时完全相同的，因此在抗原识别的各种特性上都一样。

激光兼容性（Laser Compatibility）：不同染料的激发波长不同，如果是做荧光染色，需要根据现有设备所支持的波长来选择适合的染料。

●查找二抗（Secondary antibodies） 

与查找一抗的方法类似，在检索工具第一格选择“二抗”(secondary antibodies)：

这里的“Host”是指生产二抗的物种；而这里的“Target Species”要根据一抗的宿主类型进行选择，如上文所说，例如mouse anti-human的一抗，需要匹配的是goat/rabbit/ rat… anti-mouse的二抗。

点击右侧搜索键，和一抗一样，会跳转至更精准的筛选界面：

这几个筛选条件又代表了什么呢，我们一起来看看：

靶标类型（Target Class）：如果对一抗的类型有要求，比如IgG/E/D/A/M/Y等，则需要选择这一项。

偶联物（Conjugate）：WB/DB/ELISA，通常选择HRP标记；IF/ICC等一般选择荧光标记，根据激光器的波长选择合适的荧光标记物，Alexa Fluor 488因文献引用最多、最亮最稳定，所以最常用。

交叉吸附（Cross Absorbed）：如果对背景要求较高，则需要选择交叉吸附过的二抗。

抗体形式（Antibody Form）：如果是对轻链/重链/Fab区有要求，则需要选择这一项。

第三步：就决定是你了！

经过以上多重筛选，已经可以筛选出符合我们条件的抗体了，如果还是有多个结果，要怎么选择最完美的那个呢？下图中的几个指标可以用来参考哦，比如“高级验证”“热销产品”“最多文献引用”等。

 祝大家都能选得完美抗体 

 早日拿到完美的实验数据 

转自：赛默飞生命科学