Raw264.7 细胞培养方法

免疫系统调节人体的各种生理过程。因此，提高机体免疫力，增强免疫功能，对于预防疾病的发生，恢复健康至关重要。活化的巨噬细胞可直接或间接参与免疫系统的免疫反应，通过吞噬作用清除抗原异物、衰老细胞和细胞碎片，进而分泌活性氧、活性氮和促炎因子。巨噬细胞（Macrophages）属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。小鼠巨噬细胞样细胞系 RAW264.7 是医学研究中最常用的小鼠巨噬细胞细胞系，RAW264.7 细胞株是约 30 年前从生长在 BAB/14 小鼠体内的肿瘤中获得的，这是一种 BALB/c IgH 同源株，接种了 Abelson 小鼠白血病病毒 (MuLV)。

巨噬细胞的形态会随着细胞活性、功能、环境和药物的改变而改变。例如，相关研究显示一种低分子量肽（NJP）处理引起 RAW264.7 细胞形态学改变，胞体增大呈圆形和不规则形状，伪足扩张，而正常对照组巨噬细胞呈圆形，形态正常。很多实验者发现在 RAW264.7 细胞正常培养中，细胞也会出现多边形和不规则形状，并伴有许多伪足的生成，细胞贴壁能力超强。

据了解实验者甚至用 0.25% 的胰酶消化 30 min，结果细胞仍「无动于衷」。经过本公司技术员不断探究总结出了关于 RAW264.7 细胞培养的若干建议，希望以下操作步骤能帮到大家。

收到细胞后，请对细胞培养瓶外表进行消毒，将细胞置于培养箱中进行 1-2 小时的缓冲，待细胞恢复基本生长状态后，进行后续操作。在倒置显微镜下观察整个细胞状态：

（一）细胞未长至 85% 时，用 75% 酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，若培养瓶上无特殊标注，吸去剩余培养液，只留 6-8 ml 培养液继续培养。如发现贴壁细胞有脱落，可离心收集。

（二）细胞已长满（达 90-100%），即可进行传代，具体步骤如下：

1. 吸出上清后，加入 3 ml PBS 直接拍打培养瓶，用离心管收集拍打下的细胞；

2. 再加 1 ml 0.25% 胰酶 37℃ 消化约 3 min，加入至少双倍的完全培养液终止消化（培养瓶中其他贴壁较牢的细胞可以舍弃）；

3. 将细胞收集于离心管中 1000rmp/5 min 离心，弃上清，轻弹管底将细胞弹散；

4. 收集所有细胞重悬，根据细胞数量传代培养, 首次传代建议 1:3-1:4；

5. 此细胞增殖较快注意观察培养基颜色，保证细胞营养充足。

Tips:

1.  建议细胞密度较大时再进行传代。当细胞密度较大时，细胞会出现变圆脱落或者堆在一起的现象。有些细胞甚至脱落漂浮，这些漂浮的细胞是存活的，在传代时可收集上清继续培养，第二天换液即可。

2.  优先拍打，消化次之。如果可直接拍下大部分细胞，可舍弃消化步骤。

3.  强烈推荐使用本公司对应的培养基，减少细胞培养过程的变因。

4.  耐心。培养条件、运输、环境变化等因素会影响此细胞的状态，因此收到细胞后需要调整一段时间，请耐心培养。

按以上操作传代多次，细胞一般可恢复最初的形态。此方法是本公司技术人员经多次探究，反复验证的经验之谈。一般人我们都不会轻易传授哦！相信你们也会如我们的技术人员一样优秀。