滋阴清热化痰与滋阴益气活血序贯防治IPF的方案优化
目的随着环境问题等因素的影响,呼吸系统疾病越来越倍受人们关注,近年来,特发性肺纤维化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis, IPF)疾病也逐渐成为研究的热点。理论研究：探讨张仲景论治肺病理论及用药规律,肺痿肺痹与肺纤维化的关系,旨在探索古人对肺病的治疗经验,以及对肺纤维化疾病治疗的启示。实验研究：对特发性肺纤维化的防治进行实验研究,通过不同的给药方案,旨在初步找到滋阴清热化痰与滋阴益气活血序贯防治IPF的最佳序贯治疗方案,并初步探索其分子机制,为IPF的治疗提供科学依据。方法理论研究：运用《黄帝内经》理论,整理归纳《金匮要略》中有关肺病的论述,总结仲景治疗肺病的理论和用药规律,整合《金匮要略》、《黄帝内经》及后世医家中关于肺痿肺痹的论述,结合现代研究,归纳总结肺痹和肺纤维化的病因、症状、和病程,探讨肺痿肺痹与肺纤维化的关系,以及对肺纤维化疾病治疗的启示。实验研究：动物模型与给药方法：雄性ICR小鼠105只,随机分为7组,第1组：正常组,第2组：模型组,第3组：西药组(甲泼尼松组)第4组：1号方21天,第5组：2号方21天,第6组：前7天1号方,后14天2号方,第7组：前14天1号方,后7天2号方,(1号方：麦冬半夏黄芩桔梗=1：1：1：1；2号方：麦冬黄芪当归桔梗=1：1：1：1)除正常对照组外,其他各组经气管注射博来霉素,造成IPF模型。造模第二天后,5个治疗组按照不同的给药方案给药21天,观察记录小鼠生存状态及死亡情况,21天后取肺组织、血清备用。进行以下实验。实验一：序贯防治方案对IPF小鼠生存状态和及肺形态学影响。实验方法：描绘死亡曲线,统计小鼠体重变化,用HE染色和苯胺蓝染色法观察IPF小鼠肺组织形态学变化。实验二：序贯防治方案对IPF小鼠肺中胶原表达影响。实验方法：采用碱水解法测定IPF小鼠肺组织匀浆液中羟脯氨酸含量；采用RT-PCR法测定肺组织中Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅳ型、V型胶原基因表达水平。实验三：序贯防治方案对IPF小鼠IL-6, TGF-β表达的影响。实验方法：采用ELISA法测定血清中IL-6, TGF-β含量；用采用RT-PCR法测定肺组织中IL-6, TGF-β的基因表达水平。结果理论研究：1在辨治思路上,法则天地,把天地间水液升降气化规律运用到人体肺脾胃升降气化规律上,若虚寒肺痿,振奋脾土之阳,上补于肺,若虚热肺痿,滋脾胃之津上补肺水,若实热肺痈,苦寒泻水,使肺水下降,若水液无以化生流转,当通阳化气；若饮邪停留,用药升降相合,散收相配；肺胃在解剖和经络方面亦是关系密切,肺胃同治,并时时护胃气亦是仲景治疗肺病的一大特点。其中益肺气、养肺阴、利水消痰等用药特点也为肺纤维化的治疗开辟了思路。2肺痿为虚损性疾病,肺纤维化亦见虚损性症状,益气养阴、温阳益气、消痰化饮等治疗法则,对肺纤维化的治疗有借鉴性意义；通过《黄帝内经》有关肺痹的论述,结合肺纤维化现代研究,病因上来看,以《内经》“喘而虚”为代表,肺痹并不是完全的实证,而是本虚标实之证,是体虚导致邪气趁虚而入,久郁而成痹,这与现代多数医家认为肺纤维化为本虚标实的观点一致；从症状和病程的总结来看,肺痹与肺纤维化也极为相似,认为把肺纤维化归于肺痹论治更为准确。历代医家有关肺痹的论述都对肺纤维化有重大的参考意义,其治法也值得借鉴。实验研究：实验一：治疗各组对提高小鼠生存率有一定帮助,但治疗各组死亡差异不大。甲泼尼松组小鼠较瘦弱,中药治疗组状态较好。病理形态学显示,6组肺泡组织增生明显改善,胶原纤维明显减少,炎性渗出相对较少,肺泡结构已基本恢复,6组治疗效果最为明显。实验二：HYP含量结果显示,模型组>4组>7组>5组>甲泼尼松组=6组>对照组,从统计学结果来看6组更有显著性意义。从各胶原基因表达水平来看,与对照组相比,模型组I型、Ⅲ型、Ⅳ型、V型胶原基因表达水平都有增高,可能是导致肺中胶原含量最终升高的原因之一。中药治疗组都能明显下调肺中I型、Ⅲ型胶原基因表达水平,西药甲泼尼松对下调肺中I型胶原基因明显,对Ⅲ型不明显。甲泼尼松、中药4组、5组能明显抑制肺组织中Ⅳ、Ⅴ型胶原基因表达,而6组、7组的抑制程度不明显,且表达程度与对照组接近,所以序贯疗法可能对肺泡的组织结构的重塑更为有利。实验三：各治疗组总体对血清中总IL-6含量影响不大,序贯治疗组(第6组、7组)能明显促进IL-6的基因表达,可能与促进肺组织修复和抑制纤维化有关。第6组能抑制TGF-β血清中的含量和肺中TGF-β基因表达,从而抑制肺纤维化程度。其他治疗组对肺中TGF-β基因表达有明显的抑制作用,但对血清中的TGF-β含量的抑制作用不明显。结论理论研究：1仲景论治肺病的特点：注重肺与脾胃升降相依,相生相化的关系,把天地间水液升降气化规律运用到人体肺脾胃升降气化规律上；在用药上,升降相依,散收相合,注重阳气的通达；肺胃同治,并时时护胃气亦是仲景治疗肺病的一大特点。其中益肺气、养肺阴、利水消痰等用药特点也为肺纤维化的治疗开辟了思路。2从《内经》和《伤寒》的相关论述来看,认为把肺纤维化归于肺痹论治更为准确。因此,历代医家有关肺痹的论述都对肺纤维化有重大的参考意义,其治法也值得借鉴,但在辩证治疗中,肺痿中有关补虚温阳或滋阴益气的治疗方法和经验亦有重要的临床参考价值。实验研究：
前7天1号方(麦冬、黄芩、半夏、桔梗)滋阴清热化痰为主,后14天2号方(麦冬、黄芪、当归、桔梗)滋阴益气活血为主对IPF的防治效果最佳,
甲泼尼松、单一复方治疗贯穿病程始终、或给药交替时间点延后都不是最佳的方案选择。并与促进肺中IL-6的基因表达、抑制肺中TGF-β基因和血清中TGF-β的表达、及抑制肺中I型、Ⅲ型胶原基因表达水平但维持Ⅳ、V型胶原基因正常表达有关,但其具体机理还有待进一步研究。...