逗比的康莱特诱导人肝癌细胞凋亡实验

一、康莱特诱导人肝癌细胞凋亡实验

查资料时看到一份有趣的《康莱特注射液诱导人肝癌细胞凋亡的研究》，研究组是广西医科大学附属肿瘤医院由广西壮族自治区卫生厅资助。

把主要关键内容摘录如下：

目的：探讨康莱特注射液诱导人肝癌细胞凋亡的作用, 为康莱特注射液治疗肝癌提供理论依据。

方法：采用免疫组织化学及透射电镜技术观察康莱特注射液对肝癌细胞凋亡的影响。

1.2.1　手术切除的原发性肝癌标本，均于手术切除后5 min内采取,用生理盐水或Hank’s液适量与剪碎的瘤组织一起挤滤过筛网, 离心消化, 收集滤液置于离心管, 经离心、吹打、混匀、静置等, 待组织碎片自然沉降后, 将收集的细胞等量分为3 组：

①试验组:100 μl 细胞液加入20 μl KLT 培养24 h ;

②对照组:100 μl 细胞液加入等量培养液培养24 h ;

③空白组:本底对照, 不培养。

1.2.2　凋亡细胞观察：经过处理的3 组细胞放入恒温箱30 min,涂片后进行DAB 显色, 苏木精复染, 光镜下观察细胞形态及着色情况;2%戊二醛固定, 透射电镜下观察凋亡细胞染色质的分布及有无凋亡小体形成。

1.2.3　凋亡细胞结果判断：光镜下观察细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞, 即凋亡细胞。观察20 个高倍视野, 每视野计算200 个细胞核, 根据阳性细胞所占细胞总数的百分率判断:无凋亡细胞为”-”,<30%为”+”,30%～ 50%为”++”,51%～ 75%为”+++” ,>75%为”++++”。实验结果数据采用χ2 检验。

2 　结果

2.1　免疫组化检测结果各组免疫组化结果见表1。经康莱特处理后的肝癌细胞, 光镜下观察, 有8 例(23.53%)未找到凋亡细胞, 26 例可找到凋亡细胞, 其中15 例呈强阳性(+++, ++++), 即凋亡细胞占细胞总数的百分率超过50%。

2.2　电镜下形态学改变电镜下, 对照组及空白组肝癌细胞边界清楚, 核膜完整, 可见坏死癌细胞, 细胞内结构大部分消失;而实验组大多数癌细胞形状不规则, 细胞核内染色质空虚,或染色质在核周围浓集成新月帽状结构, 核仁浓缩或碎裂, 并见到类圆形的凋亡小体, 细胞质密度增高或呈空泡状, 细胞器减少, 但细胞结构尚完整(图1)。

结论：

本实验研究发现, 肝癌细胞经康莱特注射液培养24 h 后, 其凋亡细胞的百分率明显高于对照组和空白组, 具有显著性差异(P <0.05), 且细胞凋亡百分率在50%以上者占44.12%(15/34);而对照组及空白组无1 例凋亡细胞超过50%。本实验结果提示, 肝癌细胞在自然生长、增殖过程中, 虽也有细胞凋亡, 但数量有限, 而康莱特注射液对肝癌细胞具有诱导凋亡, 促进癌细胞程序化死亡的作用。

二、问题在哪里？

看这三组材料：

①试验组:100 μl 细胞液加入20 μl KLT 培养24 h ;

②对照组:100 μl 细胞液加入等量培养液培养24 h ;

③空白组:本底对照, 不培养。

细胞液由生理盐水制成，加上20 μl KLT(约含20%中性油脂)，没有必须的养料不算，培养皿上还漂了一层油啊，连氧气和二氧化碳都进不去，肝癌细胞嘤嘤嘤哭死在培养皿底层…...

对照组加了等量培养液，虽然浓度也低于标准培养液，但比没有强好多。

这就是培养24 h 后，实验组肝癌细胞凋亡细胞的百分率明显高于对照组和空白组的秘密！

三、改进一下实验？

1. 就假设康莱特注射液诱导人肝癌细胞凋亡，那对正常肝细胞呢？用正常肝细胞也制成如上三组材料，观察培养24h后，正常肝细胞康莱特注射液培养组的凋亡率。如果有相近的凋亡率，是不是能得出康莱特注射液杀伤正常肝细胞？有肝毒性？

2. 康莱特注射液就是薏苡仁中性油脂乳剂，含20%甘油三酯，那用含同样油脂浓度的大豆油脂乳做一对照组，观察肝癌细胞凋亡率。是不是也能得出大豆油也抗癌的结论？

这些人啊，就赤裸裸，不加掩饰的做假！

注：体外细胞培养要满足比较苛刻的条件，对养料、无菌条件、PH值、气体、渗透压等等有严格要求，养好并不容易，养死容易。