Southern杂交检测样本收集注意事项

1.    新鲜组织：

用解剖刀等迅速切成小碎块，约30-100 mg，放入2.0 mL离心管中，开盖液氮速冻15 min，-80℃保存，干冰运输。

每个southern blot泳道提供2-3管样品。

注：(1) 解剖刀处理组织的时间尽量控制在1 min以内。

(2) 液氮速冻时必须开盖，以防炸裂。

(3) 对于较难提取的植物组织，如苎麻、榨菜、枣子 、鱼、甘蔗、大署等，1-2 g样品用铝箔纸包好，液氮速冻15 min，-80℃保存，干冰运输。

2.    细胞样品：

悬浮细胞 1000-1500 rpm，5 min，常温离心收集细胞。贴壁细胞用胰蛋白酶消化后，吹打收集，PBS洗涤细胞，去除多余培养基和胰蛋白酶。开盖液氮速冻15 min， -80℃保存，干冰运输。

一般情况下，细胞培养的6孔板，每孔细胞数量约为0.5~2×106个。每个离心管中的细胞数量控制在5×106个左右！每个southern blot泳道提供2-3管样品。

3. DNA样品（双蒸水水溶解）：

2-8℃短期保存，-20℃长期保存；加冰块低温运输。

质量检测

取1-2 μL的DNA进行琼脂糖凝胶电泳，无蛋白质和RNA等物质污染，无降解弥散，条带清晰。

纯度、浓度检测

OD260/280=1.8~2.0，OD260/280＞2.0；浓度≥100 ng/μL 。