小爱科普｜切片制备及注意事项
IHC即免疫组织化学，是基于抗原抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色来对组织内抗原进行定位、定性、定量的一项技术。
图1 IHC原理示意图
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切片制备
切片制备是IHC的起步，主要分为石蜡切片和冷冻切片。
石蜡切片
图2 石蜡切片流程图
冷冻切片
冷冻切片相较于石蜡片操作更简单、快捷，事先将冷冻组织储存于-80℃的温度下，然后包埋入OTC包埋剂，无需脱水，OTC包埋剂可直接取代组织里的水，除此之外，两种不同处理样本的方法也对样本产生不同影响。
石蜡包埋组织与冷冻组织对比
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注意事项（石蜡切片）
1、切片要选用尽量新鲜的组织，若存放时间过长会影响后续染色、信号检测等。
且选取组织的时候不能过大，否则后续脱水透明等步骤难以做好，还会导致组织切片破损，不完整。
2、脱水和透明要做到位，因为石蜡无法直接取代水和乙醇，如果组织中有残存的水或者乙醇，可能导致最后石蜡无法浸透组织，最终组织切片会栅状裂和龟裂。
3、透蜡的时候，应在60℃恒温箱内进行，透蜡的时间和石蜡的熔点应根据材料和室温来选择。
4、包埋的时候要注意先倒石蜡后放组织，并且要用预热过的镊子进行调整，动作要迅速，否则容易出现蜡块组织掉落的情况。
5、切片刀片要锋利，干净，必要时可以切一次擦拭一次，要选择合适的切片角度。切片机要定期校准，要根据不同的组织选择合适的切片厚度。
6、展片应在干净无杂质恒温水浴锅中进行，一般控制温度在37-40℃；捞片时要注意排除底下的气泡；烤片时要注意烤箱的温度控制，高于石蜡熔点5-10℃为佳。
7、选用普通玻片进行切片制备（没有经过静电吸附处理等操作的玻片），可以采用明胶-硫酸铬钾法（abs9131+abs9135）或多聚赖氨酸法（abs9172）来防止组织脱片。
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