多重分子检测技术：特点及其在病原体诊断中的应用

面对感染性疾病的病原学检测，临床医生希望我们能够快速准确的出具报告，然而传统的微生物的检测方法达到此目标相对困难，但随着分子技术的不断应用，使这个目标得以实现。自新型冠状病毒疫情爆发以后，国家卫健委发文要求有能力的二级以上的医院要开展核酸检测，建立分子生物实验室，可以看出快速准确、全面的病原学检测已经越来越成为我们临床的刚需。通过多重的分子检测，可以覆盖多种病原、敏感度高、结果准确、报告快速、不受抗生素使用影响、操作简便，其重要性日益凸显。

一、多重PCR技术简介

多重PCR技术概括的说就是在同一个PCR体系中同时加入多种靶标序列的特异性引物，对多个DNA或者RNA模板，或同一个模板当中多个区域同时进行PCR扩增。自1988年 Chamberlin等首次提出这一概念起，多重PCR技术已被广泛应用于核酸诊断的许多领域，包括基因敲除分析、突变和多态性分析、定量分析以及RNA检测等, 在感染性疾病领域使用也日益广泛。它具有高效性、可靠性和简便性。

多重PCR技术有以下三方面应用：

1、可以对同一份标本中的多种病原同时进行检测，例如细菌，病毒，真菌等，可以检出共感染；

2、也可以同时检测同个病原的多个位点，可以提高检测性能，例如新冠检测；可以用于区分病原体的多种血清型/基因型，比如说甲流的不同分型等。

3、随着细菌耐药问题越来越严重，同时进行检测病原和耐药基因也越来越重要。CLSI100对耐药基因的检测部分进行了非常详细的描述，也给予推荐。比如说MacA基因，推荐考虑用分子靶标的技术来进行检测，比我们的一些表型实验来的更加准确。这也促使我们各个厂家去开发耐药基因的检测。

二、常见多重PCR检测方法介绍

三、多重PCR在感染检测中的应用

1、应用于呼吸道感染检测：

呼吸道的多重PCR检测需要可以达到10重以上，涵盖常见的病毒和非典型病原；

多重PCR检测可以对不同的病毒进行分型，例如甲流，副流感病毒等。可以有效缩短报告时间，并可以检测不同病原的共感染，有研究表明新型冠状病毒阳性患者21%存在共感染。

2、应用于中枢感染检测：

有研究表明采用多重分子检测（FilmArray）和常规检测方法（包括常规、生化、PCR、培养等）进行对比，平均病原体报告时间缩短了33.8小时，实验组的住院时间减少了1.5天，医疗花费减少。

3、应用于耐药基因的检测：

多重巢式PCR检测试剂可以同时检测33种病原和耐药基因。在检测金黄色葡萄球菌时，同时检测其耐药基因MecA/C基因以及MREJ片段。对MRSA（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌）的阴性预测值（NPV）为100%；可以辅助降低万古霉素等抗生素的过度使用。

四、总结

多重分子扩增技术可以加强实验室对病毒、非典型病原以及耐药基因等的检测能力。

多重分子检测更全面，可以有效检出多种病原的共感染。结合微流控技术，可以有效提高多重分子检测的效率，缩短病原体的报告时间，使用药更精准。

此篇文章属于转载文章，来源：京港感染论坛《多重分子检测在感染性疾病中的应用》专题讨论会 ，作者：罗燕萍。订阅号若有侵权或转载限制请联系我们（或在公众号下方留言），我们将第一时间联系您并进行删除。