技术达人精品课20180103-王华【Q&A】
学习是个持续的过程，让我们一步一个脚印踏踏实实前进吧。
Ruokuozhone
组织在支持模上敷好胶后马上可以用冷冻锤压吗？我用冷冻锤压了，就担心组织和冷冻锤粘在一起紧紧的拿不下来，组织会粘紧冷冻锤拿不下来吗？
王华
冷冻锤冷冻组织的时候，会出现将组织黏住的现象，当组织完全凝固的时候，轻轻将冷冻锤与台面敲击数下，冷冻锤就会与组织分离了。在组织中央未完全凝固的时候移除冷冻锤，就会导致组织与冷冻锤黏连的现象。冷冻组织时需要一点点耐心。
跳出三界
王老师，切甲状腺的组织时有时会觉得粘粘的，片子切不平整。或者聚成堆切不成片！怎样处理啊？
王华
出现这样的现象原因一般为组织冻得冷从而不够硬，或者是切片刀架温度不够低，引起切片在刀架上展开不良。您根据自己使用的冰冻切片机的功能和状态，检查一下导致切片时组织不够冷或刀座不够冷的原因。
小妖
王老师，速冻是不是把冷冻台降到-50度左右？
王华
有些品牌冰冻切片机的速冻台可以设置温度，有些品牌的速冻台不能任意设置温度。从减少冰晶形成的原理来说，速冻台的温度越低越好。不是所有的切片机的速冻台的制冷都能达到-50℃，速冻台的实际温度低于-30℃就基本满足制片需要了。
练练
王老师，如果出现了冰晶，这块组织还有补救的办法吗？
王华
组织冷冻后出现冰晶，如果严重影响诊断，建议重新再取材，用正确的方法冷冻。如果没有重取的组织，可以让组织自然解冻后，重新按照正确的冷冻方式冷冻后再切片，可以减少冰晶对诊断的影响。但二次冷冻的组织与一次冷冻的组织在细胞的细微结构上会有所差异，也会对诊断造成困扰。所以，一次性正确冷冻组织非常重要，“二次补救”的措施都是不能达到正常的效果的。
海边
王老师，如果同时来多块冰冻组织，只有一个冻锤的情况下，唯有多备几个砝码，是吗？还是还有更好的办法？谢谢！
王华
多备冷冻锤是一个简单有效的方法。也可以使用液氮冷冻，或者增加额外的组织冷冻辅助设备。
君少
形成冰晶是否与裱片的玻片有关(组织-20度，玻片常温)?或者裱片时玻片的温度有关？
王华
无关。
稳
我的问题又来了，王老师我们取材医生取材时习惯性稍洗组织，请问当所送标本血液较多影响视野时，可以用自来水快速清洗再取材吗？水洗对冰冻形态影响有多大？能不能用生理盐水来洗？
王华
水是低渗液体，水洗组织，会导致组织内的细胞水肿从而影响组织的形态特点，不同组织水洗后引起的水肿程度也会有所差异。冰冻制片不建议水洗组化。如果确实需要把组织的血液和表面污物洗掉，建议用与组织等渗的生理盐水进行清洗。
紫色梦影
ocT和胶水速冻的时间有区别吗？
王华
包埋剂的成分不一样，含水量不一样，冷冻速度会有所差异。但在实践工作中，OCT和胶水的差异在冰冻制片中不是表现在冷冻速度不同而导致问题，一般是在切片的顺畅程度、冰余组织中的包埋剂是否易溶于水而导致包埋剂残留或影响固定液的穿透影响固定效果，影响后期冰余组织的常规制片质量。
兰子
王老师，我学到过一个做肺组织冰冻切片时，用OT胶和生理盐水一比一比例混合，用针筒从肺门打进去，切出的片子没有冰晶，而且组织结构也很好，这是什么原理呢，能运用到平时工作中吗？
王华
您这个方法可以使肺泡组织撑开，切片中肺组织的形态结构会比较清晰。用于一些不赶时间的研究性冰冻制片时可以使用。病理术中冰冻制片需要赶时间，这个方法的应用就比较受到限制，也不是必要的。
醉卧红楼
王老师，您好！除了速冻（液氮、冷冻锤等），还有哪些办法有效减少含水量丰富的组织的冰晶？
抹茶达思
我们取材也是干取，放在组织托上之前会用纱布先擦一遍，吸干水，这样做能减少冰晶的形成吧？
王华
统一回答：含游离水分多的组织，冷冻前将多余的水份用吸水纸吸净，能有效减少冰晶的形成。
小乔
冻得太硬复温时会不会产生冰晶？若原本就有冰晶，复温会不会发生位置变化？
跳出三界
王老师，冰冻切片的时候切出的片子碎，用手回温一下有好转。请问用手回温对切片有影响吗？这样的组织是冻过了吗？发生这样的情况怎样解决？谢谢王老师！
小乔
王老师，我想问如果我把组织冻好了，觉得冻的太硬了，假如现在组织没有形成冰晶，如果我现在用手指复温，在组织复温过程中会产生冰晶嘛？若原本就产生了冰晶，现在复温后会不会发生位置变化？谢谢。
Xingmei
请问如果冷冻锤压了冷冻过头怎么办？
华近
请问王老师，这个以降低减少冰晶，但是碰到质韧的肌瘤，这样的就会冻过，这个问题怎么解决？谢谢。
Wyz
冷冻锤冷冻组织时，会不会因为温度过低出现组织裂痕，特别是甲状腺组织？
菋淽
王老师您好，冰冻切片有时组织脆硬，切片不完整，不连片，我会用手指按压回温，这样做会加重冰晶的形成或影响染色吗？
跳出三界
王老师，记得有老师说过不能用手指回温，那如果遇到冷冻过了的组织有什么好的处理方法吗？
王华
统一回答：速冻台和冷冻锤温度越低，冷冻组织时冰晶形成越少，缺点就是组织冷冻温度过低在切片时容易出现组织碎裂、切片弹跳引起厚薄不均等现象，影响切片质量。
解决办法：让过冷的组织适当回温至利于切片的温度再切片（-15℃~18℃左右）。正确的回温方式是将整个组织在室温中放置片刻回温，或者将冷冻凝固的组织放置在箱体（箱体温度设置在-15℃~18℃）中缓慢回温后切片。组织回温时不出现冻融和二次凝结，不会出现细胞形态结构的改变。严禁用手指捂组织进行回温，手捂回温及其容易引起组织冻融，组织二次凝固后将形成组织内不规则冰晶，产生显微镜下组织形态结构改变的后果。
Miss杨杨
王老师，冷冻温度过低或者冷冻时间稍微长一点，对于肝脏和甲状腺就会出现切片碎裂的现象，而平滑肌瘤就会很硬，切的一条一条的红白相间，这种情况可以用手复温吗？有的囊壁和 肌瘤出现分化后马上脱片现象，请问有什么好的处理方法吗？还有遇见有钙化灶的怎么解决？谢谢。
王华
组织过冷的解决方案参照上面一个回答。
囊壁和肌瘤出现分化后马上脱片现象，因为我自己在做冰冻切片染色操作过程中基本上省略分化这个步骤，这个问题没有经历过。你可以在分化液的酒精浓度和酸度上分析一下原因。或者使用优质的苏木素染色液，控制苏木素染色时间，将分化步骤省略掉。
至于钙化的灶，一般只能寄希望于取材时避开，有些小的钙化灶也是很难避开的，切片损耗刀片并引起切片组织划痕也是没有办法的事，切片不影响诊断就OK。
敲黑板~~这期精品课“提出好问题”的活动中，获奖的小伙伴是哪几位呢？
Ruokuozhone
稳
兰子