Genie带你认识细胞周期

细胞周期（cell cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，在这一过程中细胞的遗传物质复制病均等地分配到两个子细胞中。细胞周期一般分为5个阶段：G0(静止期)、G1期（DNA合成前期）、G2期（DNA合成期）、G2期（DNA合成后期）和M期（分裂间期），如果根据DNA数量来区分的话可以分为G0/G1期、S期和G2/M期。

细胞周期检测方法

流式细胞术是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒(如微球, 细菌, 小型模式生物等) 逐个进行快速定量分析和分选的技术，经单克隆荧光抗体或者核酸特异性染料对细胞进行染色后，通过FCM可以分析细胞的一系列参数。PI（碘化丙啶）为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系。通过对所有细胞进行染色，那些准备分裂的细胞将含有越来越多的DNA，并显示出比例增加的荧光，利用流式细胞术来检测荧光含量进而确定各个阶段细胞的百分比。需要注意的是由于PI染料不能进入活细胞，所以在染色前经常会用乙醇对细胞进行固定，另外PI也会结合RNA，进而对实验结果造成影响，所以需要额外加入RNA酶。

实验流程（以碘化丙啶PI为例）

细胞固定：300g离心5min后，弃上清收集细胞沉淀。用预冷的PBS洗涤2次后弃上清，逐滴加入-20℃预冷的70%乙醇，一边加一边摇匀。最后置于4℃下固定至少30min（固定时间建议做预实验进行优化）。

细胞染色：300g离心5min后弃上清，用2ml的PBS洗涤2次（注意避免Dnase污染），加入适量的PI染料（1mg/ml）和Rnase（2mg/ml），室温避光孵育15min。

上机前过滤：PI具有很强的粘附性，容易形成细胞聚团，建议可以使用200目的筛网过滤样本后上机

上机检测：低速上样，建议有效的单个细胞采集10000个以上。

实验注意事项

1. 一定要用纯水配置70%乙醇，PBS有盐析出会对细胞造成物理性伤害。

2. 与抗体抗原结合不同，核酸染料与DNA的结合是一种结合状态和游离状态之间的松散平衡，并不牢固，因此离心洗涤会破坏PI的结合，造成荧光强度下降，因此染料孵育完之后不要进行细胞清洗。

3. 上机时，荧光通道设置为线性（lin）放大。

4. 需要排除粘连体（使用A,H和W其中两个参数）。

5. 上样浓度设置在5*10^5-1*10^6，进样速度为低速，样本在1h内上机，否则CV值会增加。

6. 对于有GFP的细胞，乙醇处理容易导致GFP破膜后溢出，可以先用0.5%多聚甲醛固定15min之后再用乙醇固定。

7. 在加入乙醇过程中如果出现了絮状物，则说明细胞状态差，或者制备过程中出现了细胞损伤，有DNA释放缠绕细胞，造成团块，需要重新制备样本。

细胞周期检测相关产品推荐

Genie试剂盒质控数据

SKin C1是一种小分子抑制剂，对3T3细胞系进行处理后会延长G2/M期的比例，降低G1期的细胞比例。本次实验在3T3细胞培养体系中加入20uM的SKin C1的小分子抑制剂培养24h后收集细胞，检测细胞周期各个阶段的细胞比例，与对照组（图A）相比，实验组（图B）的G2/M期的细胞比例增加，G1期的细胞比例出现降低。

Genie是一家来自英国的生物科研试剂生产商，产品种类丰富，可满足绝大多数生物学实验的需求，目前Genie品牌的产品正在火热促销中，所有产品均可享受10个折扣点优惠，如果您发表的文献中涉及到Genie的产品我们也会送出精美的礼品。