什么是腺病毒载体?

腺病毒(adenovirus ) 腺病毒颗粒没有包膜的直径为70~90nm的颗粒,由252个壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7~9nm。衣壳里是线状双链DNA分子,约含35 000 bp,两端各有长约100 bp的反向重复序列。

腺病毒的结构蛋白在细胞核内聚集形成病毒衣壳,病毒的基因组被包装进去,形成有感染能力的病毒颗粒,并终裂解宿主细胞被释放出去,完成腺病毒的生活周期。

特点:

1.腺病毒具有宿主范围非常广,能感染增殖和非增殖各种细胞,如肝细胞、血管内皮细胞等

2.腺病毒基因组较大(36kb)绝大多数基因组均能被外源基因取代,故插入大片段外源基因的潜力大。

3.不整合到染色体中,目的基因在宿主细胞基因组外游历状态下表达,无插入致突变性,对人致病性低;

4.是瞬时转染,表达快速,容易将外源基因直接转移到靶细胞中,有效表达成活性蛋白。

5.能自行复制,有效进行增殖,产生滴度高;

6.与人类基因同源;

7.能在同一细胞株或组织中设计表达多个基因。简单的方法是将含有两个基因的双表达盒插入腺病毒转移载体中,或者用不同的重组病毒共转染目的细胞株来分别表达一个蛋白。

综上腺病毒载体的特点,产生了其应用和意义:

1.应用于体内接种疫苗。用携带**调节基因或肿瘤特异抗原已近的腺病毒载体转入相应肿瘤细胞以诱导抗肿瘤**反应,可制成具有抗肿瘤活性的瘤苗。

2.应用于信号转导,基因转位,Co-IP,动物实验,干细胞研究等科研实验。

3.可以完成较高难度的克隆构建,包括具有细胞毒性作用基因的腺病毒构建,在短时间内完成从原始质粒到病毒DNA的构建工作。

4.产生滴度高,非常适于基因**。例如:Rosenfeld等用构建的含肌糖原磷酸化酶cDNA的重组腺病毒感染肝细胞,糖原磷酸化酶活性增加46倍,提示可以对糖原蓄积**进行基因**。

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