胰岛细胞染色:Mallory Heidenhain Azan(MHA)染色法
胰岛是胰腺的内分泌部,在胰腺尾部较多。
苏木精-伊红染色(HE染色),胰岛着色浅淡。
几个、十几、几十个甚至上百个内分泌细胞团。
MHA能区别A(α细胞)、B(β细胞)、D细胞(δ细胞)。豚鼠的胰岛还有一种不含颗粒的丙细胞(C细胞、γ细胞)
胰腺自溶很快,杀死动物后立即取材并固定。
Mallory Heidenhain Azan染色法
试剂:
⑴固定液:Helly液、Bouin液
⑵偶氮卡红液:偶氮卡红G(Azocarmine G)0.1克或偶氮卡红B 0.25~1克,蒸馏水100毫升,煮沸,冷后过滤,加冰醋酸(Glacial Acetic acid)1毫升。
⑶苯胺蓝橘黄G液:苯胺蓝(Aniline blue)或亮绿(Brilliant Green)或坚牢绿(Fast green FCF)0.5克、橘黄G(orange G) 2克在蒸馏水100毫升煮沸,冷后过滤。加冰醋酸。(结缔组织染色用蒸馏水稀释3倍)
⑷分色液:5%磷钨酸(Phosphotungstic acid)水溶液;1%苯胺(95%)酒精 液:苯胺(Aniline)1毫升,95%酒精 100毫升;95%酒精溶液
方法:
⑴取豚鼠或小狗小块胰腺,固定于Helly液24小时或Bouin液36小时,流水冲洗24小时。
⑵常规脱水、透明、石蜡包埋,切片厚4~6微米。
⑶切片经二甲苯脱蜡,经酒精下行至70%酒精。
⑷加少许碘酒脱汞,5%硫代硫酸钠( Sodium hyposulfide)水溶液去碘,水洗。
⑸置事先加热至60C的偶氮卡红液56~60C染色1小时,室温冷却,蒸馏水洗。
⑹1%苯胺(95%)酒精液分色1~2分钟至B细胞呈鲜红色、其它细胞胞浆淡红或无色。
⑺95%酒精 洗去苯胺油,经酒精下行入水。
⑻5%磷钨酸水溶液或2%铁明矾水溶液媒染1~3小时,可过夜。
⑼蒸馏水速洗或直接入苯胺蓝橘黄G液染色1~3小时,可过夜。
⑽蒸馏水速洗或直接入95%酒精分色至A细胞呈橘黄色。
⑾无水酒精脱水,二甲苯透明,树胶封片。
结果:A细胞橘黄色;B细胞红色;D细胞淡蓝色;腺泡细胞酶原颗粒橘黄色;细胞核红色。