组织特异性 Cre 真的那么特异吗？

师妹：师兄，应该是肝脏特异表达的 Cre，怎么好像在脑里也有表达？

师兄：唉，理想是丰满的，而现实往往是骨感的。其实，Cre 的非特异性表达是普遍存在的啊！大部分 Cre 品系在其它组织中也有 Cre 活性。

由于 Cre 的非特异性表达导致基因敲除的脱靶，有可能在你不自知的时候直接影响到你的实验数据。

比如，受神经元特异性 Emx1（empty spiracles homolog 1）启动子驱动的 Cre 小鼠，除了在新皮质和海马中高表达 Cre 以外，在肾脏和胸腺中也会表达 Cre。

图1. Emx1-Cre在大脑（A）、胸腺（B）、肾脏（C）的表达。（图片来自 jaxlab）

师兄：如果 Cre 的脱靶发生在生殖细胞里，那就有可能直接得到全身性敲除小鼠了。还是以 Emx1-Cre 为例，研究发现在一小部分生殖细胞中也有 Cre 表达，并且雄性与雌性都可能出现这样的脱靶。

师妹：那我怎么知道有没有发生生殖系脱靶呢？

师兄：我们可以通过 PCR 方法发现是否发生了全身敲除。只需要在 flox 区域的上下游分别设计一条上游引物和一条下游引物（下图橙色箭头）。

如果发生了全身敲除，那么在做基因型鉴定 PCR 时，会出现一条最短的条带。将带有这条短带的小鼠移除即可。