引物设计的基本原则是什么？

你的PCR设计引物究竟从何而来？这个问题似乎很多实验新手小白在刚刚接触PCR实验的时候还来不及思考。PCR的第一步就是引物设计。引物设计的好坏，直接影响了PCR的结果，因此这一步很关键。成功的PCR反应既要高效，又要特异性扩增产物。目前可以使用的引物设计软件很多，但仍有许多细节需要注意。下面小编给您罗列下引物设计的基本原则！

引物设计的下列原则供您参考：

1) 引物最好在模板cDNA的保守区内设计。

2) 引物长度一般在15-30碱基之间。

3) 引物GC含量在40%-60%之间，Tm值最好接近72℃。

4) 引物3′端要避开密码子的第3位。

5) 引物3′端不能选择A，最好选择T。

6) 碱基要随机分布。

7) 引物自身及引物之间不应存在互补序列。

8) 引物5′端和中间△G值应该相对较高，而3′端△G值较低。

9) 引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。

10) 扩增产物的单链不能形成二级结构。

11) 引物应具有特异性。