Tmem119-CreERT2小鼠构建

Cre蛋白是一种存在大肠杆菌噬菌体P1的重组酶，它可以特异性识别细胞内基因或DNA上的LoxP序列并根据LoxP序列的位置和LoxP序列之间的关系，介导不同的特异性重组反应。

条件性基因敲除的基本原理利用的重组方式是：当两个LoxP位点位于一条DNA链上且方向相同Cre重组酶能有效地敲除两个LoxP位点间的序列（图A）

Cre-loxP诱导基因重组的方式

图为Cre-loxP诱导基因重组的方式，敲除（A）、翻转（B）、易位（C）

小胶质细胞是位于大脑中的巨噬细胞，主要负责中枢神经系统 (CNS) 的免疫防御，对维持大脑内稳态有着重要作用。

然而，由于缺乏合适的研究工具，当前的研究方法很难区分小胶质细胞及脑内其它巨噬细胞，因此，人们对小胶质细胞功能机制的深入研究受到了一定的限制。

之所以很难区分小胶质细胞及脑内其它巨噬细胞，是因为这些巨噬细胞同源，许多标记物都相同，如整合素 α M (ITGAM/CD11b)、表面糖蛋白 F4/80、造血标志物CD45、溶酶体蛋白CD68、离子钙接头分子（Iba）-1， Cx3趋化因子受体1（Cx3cr1）、MER原癌基因酪氨酸蛋白激酶（MerTK）等。

事实上，早前出现的Cx3cr1-Cre和Cx3cr1-CrERT2品系都是标记所有CNS巨噬细胞，并不能区分小胶质细胞和脑内其它巨噬细胞。

因此，使用Cx3cr1-GFP、Cx3cr1-Cre或Cx3cr1-CrERT2品系通常将CNS中所有巨噬细胞的混合体作为整体进行评估，而不是只针对小胶质细胞这一类进行研究。

此外，现有的转基因品系如Sall1-GFP、Sall1-CreERT2、Cx3cr1-GFP、Cx3cr1-Cre或Cx3cr1-CreERT2通常是替代性敲入策略产生的，即表达外源性敲入的序列，内源性基因不表达，但是该类策略有可能会影响小胶质细胞的表型，因此，迫切需要新的基因工具来对小胶质细胞进行研究。

我们利用CRISPR/Cas9技术在Tmem119基因的终止密码子前插入了2A-CreERT2基因盒，使得Cre重组酶具有Tmem119启动子特异性，且需要tamoxifen的存在才能激活。

通过将Tmem119- CreERT2与荧光报告基因小鼠基因交配发现，Tamoxifen诱导的Tmem119- CreERT2系可以在很长一段时间内对小胶质细胞产生稳定的遗传修饰。