【干货】细胞周期实验常见问题解答

　　1.是否可以直接用乙醇固定细胞？

　　不可以，直接70~75%乙醇加入很容易导致细胞聚团现象，很难重悬成单细胞，影响固定效果，甚至容易导致固定后无细胞沉淀的现象。正确做法是：待细胞充分分散成单细胞后，缓慢地滴入无水乙醇中，使其终浓度为70~75%乙醇。

　　2.细胞量过少，无法获得数据结果？

　　▲首先，要保证收集足够的细胞样品（个人经验至少收集100万左右）；如果药物处理后细胞死亡过多，应该降低药物浓度；

　　▲其次，固定细胞时先用预冷的PBS重悬细胞，再逐滴滴入无水乙醇中；

　　细胞清洗时，不可过度吹打细胞，以防产生过多的细胞碎片；

　　▲最后，尽量采用尖底的离心管和水平的离心机，离心后尽量用移液枪吸走上清，不要倾倒，残留一点，不要吸完；

　　3.什么样的数据结果可以用？

　　▲G2/M期细胞的DNA含量是G1期的2倍，在直方图上形成一个2倍于G1信号峰的高斯峰；

　　▲CV(变异系数)表示峰的宽度，CV值越小，峰形越好，最好是在5%左右，一般小于10%也被认可。

　　▲RCS最好是在1~3，高于5则不被认可。RCS高，说明数据的分布和软件所建立模型的预期值的差别比较大，可能由于处理细胞的时候RNA酶消化不好，或者是PI的浓度不佳造成的。

　　4.如何提高分辨率和精确度？

　　变异系数（Coefficient of Variation，CV值）反映G0/G1峰分辨率和精确度。而样品CV值为样品固有，与样本制备过程中细胞质量有关。细胞碎片越少、细胞聚团越少、RNA酶消化越充分，可以减少样本的CV值，提高G0/G1峰分辨率和精确度。