文献阅读篇

内质网（ER）应激促进肿瘤细胞逃避免疫监测。然而，基本机制仍然未知。本文作者发现，内质网应激诱导肝细胞癌（HCC）细胞释放外体，通过调节巨噬细胞的程序性死亡配体1（PD-L1）的表达来减弱抗肿瘤免疫。

作者首先展示了ER stress相关marker的蛋白和mRNA水平肝癌组织中的表达明显高于癌旁，说明肝癌患者普遍存在内质网应激。

并且ER-stress的激活预示着较差的总生存。

随后作者发现，表达高水平ERmarker GRP78的肿瘤组织在基质中有大量的CD68染色，说明CD68+巨噬细胞浸润较多，而表达低水平GRP78的肿瘤组织中CD68+巨噬细胞浸润要低得多（A）。B：PD-L1表达与GRP78水平呈正相关。C-D：qPCR和Western Blot分析表明，与配对的癌旁组织相比，肿瘤组织中PD-L1的mRNA和蛋白质明显上调。

E:作者已经证明了ER stress与巨噬细胞浸润和PD-L1的表达相关。随后作者进行了免疫荧光，发现在GRP78高的肝癌基质中，PD-L1与CD68+巨噬细胞存在共定位。F：高的PD-L1表达预示着差的生存。

接着，作者用PKH67标记的外泌体与巨噬细胞共培养，发现巨噬细胞可以有效地摄取外泌体（A）。

B-E通过流式细胞术,WB,免疫组化和qPCR分析显示，与ER stress的HepG2外泌体共培养后，巨噬细胞中的PD-L1表达明显上调。

体内实验进一步证明TM诱导ER stress的肝癌细胞外泌体增加巨噬细胞PD-L1的表达。

作者进一步研究了ER-stress的肝癌细胞外泌体处理的巨噬细胞对T细胞的影响。

A-C：与对照组相比， ER-stress的肝癌细胞外泌体处理的巨噬细胞显著降低CD8+T细胞比例，并降低T细胞中的IL-2生成。

D：ER-stress的肝癌细胞外泌体处理的巨噬细胞促进T细胞凋亡。

为了找到发挥作用的关键分子，作者做了ER-stress的肝癌细胞外泌体的高通量测序，并以miR-23a-3p为研究对象。

B-C:作者通过生信分析预测miR-23a-3p靶向PTEN，并证明miR-23a-3p可调节巨噬细胞PTEN/AKT通路，和PD-L1的表达。（直接用mimic和inhibitor做统计比较差异着实让人搞不懂）

最后，作者进一步证明外泌体miR-23a-3p通过PTEN/AKT通路调控D-L1的表达。

本文的研究聚焦与最近火热的免疫和外泌体研究。文章主要思路：

1 ER stress与肝癌密切相关。

2 ER stress的肝癌外泌体促进巨噬细胞PD-L1表达。

3 受影响的巨噬细胞促进T细胞凋亡。

4 ER stress的肝癌外泌体内miR-23a-3p通过PTEN/AKT通路调控巨噬细胞D-L1的表达。

总的来说文章不算太严谨，而且没有返回到巨噬细胞或T细胞对肝癌细胞的影响，机制也没有很深，可能是没有发到更高分文章的原因吧。同样大家可以用类似的思路做课题，比如乏氧/ROS应激/其他处理的某肿瘤细胞促进某基因在外泌体中高表达，从而对巨噬细胞/DC细胞/T细胞等免疫/基质细胞产生影响，这些细胞又通过某机制对癌细胞有什么反馈的功能……

好了，今天的文献就分享到这里吧，下次见。