免疫组化专题-第一课20180321-倪灿荣老师Q&A
技术达人精品课--免疫组化专题3月21日正式开课之后，受到各位病理技术伙伴的广泛欢迎。由于当天线上问题较多，倪灿荣老师回答了前三个问题，现将剩下的问题整理为Q&A，希望对您的工作和学习有帮助。
听风看月
请问老师定位核的浆也阳了是怎么回事？
倪灿荣老师
核表达蛋白有时免疫组化強表达会看到类似浆表达，这是信号经放大后从核内溢到浆内有关，如核没有表达，而表达在浆膜，那可能就考虑是非特异性染色，常常可见PCNA,Ki67常见。
~S~
大家ki-67用什么修复？一抗多久？我们的阳性率很低。
倪灿荣老师
Ki67最好碱修复，阳性率低手工染可在室温增加一抗孵育时间，寻找合适肿瘤的克隆号也很重要。
Amy Yang
现在病理每个新试剂进入实验室都需要做验证呢，还有不同批号的同一试剂需要做批间验证吗？现在在这方面有要求吗？（前面这两个问题，直播中已回答）那这方面验证有标准吗？（提问者又追加了一个问题）
倪灿荣老师
关于新增一抗/或批号是有必要进行标准质控验证，另外实验室ISO-15189建设项目是有这方面要求。
吴平
单克隆和多克隆抗体有什么区别？
倪灿荣老师
单克隆与多克隆抗体是有区别的，主要生产方式不同、单克隆抗体是针对一个抗原决定簇扩增，而多抗是针对多个抗原决定簇、特异性、敏感性、亲合力也存在差异，选择抗体的标准：除了克隆号外，首先选兔单抗、其次是鼠单克、兔多抗。
Amy Yang
有些即用型试剂（一抗），做预实验，稀释了100倍效果也很好，那这种情况，倪老师建议做稀释吗？
倪灿荣老师
即用型一抗只要不影响结果可以稀释用，个人观点，仅供参考。
语嫣
掉片子的原因，是组织固定不好是吗？
倪灿荣老师
脱片大部分原因是组织脱水透明不彻底，固定不好与防脱片质量也有很大关系，关键是做HE染色是否脱片，如果也脱那很大程度是前处理不当，如果不脱可能是后者，修复温度过高，修复液浓度均有关系。最主要煮时不要对着组织冒泡。
六翼天使
对于鉴别葡萄胎的p57我们做了很多例，请问有好的公司的抗体品牌介绍介绍吗？或者有什么技术上的因素，我们用的是全自动免疫组化仪果总是阳性，没有一例阴性。
倪灿荣老师
p57KIP2为依赖cyclin激酶（CDK）抑制剂和肿瘤抑制基因定位于11p15.5，通过阻断细胞周期中G1/S期的转换，实现对细胞周期的负调控，进而阻止细胞的增殖，这个基因是母源等位基因表达，父源等位基因的表达因印记而被抑制，在妊娠宫内膜中，蜕膜细胞p57表达，但是分泌腺体中无表达。正常胎盘中，>30％滋养叶细胞、绒毛间质及绒毛中央滋养层细胞岛细胞核表达该蛋白，合体滋养层无表达。完全性葡萄胎均由父系DNA产生，p57不表达；部分水泡状胎块为三倍体，由一个母源性及两个父源性单体基因构成，p57表达。
付娜
为什么柠檬酸不容易脱片，EDTA容易脱片，用锅煮沸抗原修复的。
倪灿荣老师
EDTA是一种螯合剂，可用于组织细胞内的蛋白质提取，因此对组织的损害成度要高于柠檬酸缓冲液。
云
倪老师，您好，我想问一下现在即用型的一抗的保质期一般都是4℃一年，我们有过期的试剂，做出来的片子还符合预期结果，请问这样的结果可靠度能有多少呢，这样的过期试剂只要能做出想要的结果就能继续使用吗？
倪灿荣老师
针对过期的即用型一抗，继续使用会存在一定的风险，尤其是重要的一抗（具三类证的一抗）可能存在假阴性的风险，尤其组织细胞内抗原量较弱，会存在假阴性，不建议使用。
玉兰
免疫组化操作过程中，一抗、二抗的冲洗时间由3*3min→3*（1.5—2min）（冲洗液的量是一定的），对结果有什么影响？谢谢老师。
倪灿荣老师
冲洗时间3x3min是标准,一抗冲洗最好每张用滴瓶冲洗后再浸泡洗。缩短冲洗时间是否影响结果没有专门研究。
王琼
倪老师，请问FISH中的蛋白酶K消化用什么浓度的溶液稀释比较好？最终终浓度是多少？
倪灿荣老师
FISH中的蛋白酶K浓度200μg/ml水浴至37℃ ，蛋白酶K预热10min。
时间长短根据消化情况判定。
韦韦
恶性黑色素瘤的免疫组化要先脱色吗？脱色会影响结果吗？
倪灿荣老师
恶黑染色脱色效果不理想，易脱片，最好改用AEC供氢体，呈红色。
吴平
增加细胞通透性的吐温会影响膜抗原的表达吗？
倪灿荣老师
吐温的浓度不要太高，不会影响IHC的表达，只会增加。针对膜抗原没有研究过，你可研究写篇相关文章。
yoyo
请问手工做出来的标记表达不均匀，怎么避免？
倪灿荣老师
手工做IHC不会引起表达不均，要注意不要干片，留下的PBS也不要太多，否则会引起表达不均，另划圈要离组织远一点，避免边縁效应，加完一抗可以晃动一下湿盒，可以避免不均。
除了以上问题，咱们病理技术伙伴们在工作中还会碰到各种各样的问题，那么互相请教、一起讨论，一定可以事半功倍！