【揭秘】P3实验室之核酸检测

随着新冠疫情进入“常态”,每天全国都有上万份新冠肺炎核酸样本等待被检测。P3实验室作为“手撕病毒”的重要阵地,究竟是什么样子呢?病毒在P3实验室是怎样被“揪出来”的?下面就跟小析姐一同揭开该院P3实验室的神秘面纱,以及核酸的检测流程。
实验室是进行科研工作的必需场所,根据危险度等级,包括传染病原的传染性和危害性,国际上将生物实验室按照生物安全水平英文是Biosafety level,简称BSL,分为P1、P2、P3和P4四个等级。
P1-P4实验室可以承担的工作也根据安全等级进行划分,其严格等级从低到高。
P1实验室又称基础实验室,适合对人体、动植物或环境危害较低,不具有对健康成人,动植物致病的因子。
P2实验室又称基础实验室,适用于对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子,对健康成人、动物和环境不会造成严重危害,有有效的预防和治疗措施。
P3实验室又称防护实验室,适用于处理对人体、动植物或环境具有高度危害性,通过直接接触或气溶胶使人传染上严重甚至是致命的疾病,或对动植物和环境具有高度危害的致病因子,通常有预防和治疗措施。
P4实验室是最高级别防护实验室,适用于对人体、动植物或环境具有高度危害性,通过气溶胶途径传播或传播途径不明,或未知的、高度危险的致病因子。没有预防和治疗措施。比如埃博拉病毒、HIV。
那么,核酸检测在P3实验室是如何进行的呢?
核酸检测是确诊新冠肺炎的“金标准”,而检测流程中的每一个环节都是精细活,容不得半点马虎。实验室内的检测流程可分为5个步骤:检测前的准备工作——核对样本信息——样本灭活——开盖加样和核酸提取——PCR反应体系配制——核酸扩增检测——检测完成——高压灭菌。
第一步,检测前的准备工作
打开样本前,必须做好全方位的防护。在实验室的洁净室,汪博士穿上 隔离衣、防护服、防护口罩、护目镜、面屏、双层医用乳胶手套、防水靴套,每个步骤都不能有错。
第二步,核对样本信息
进入实验室核心区后,先用75%酒精对送样箱进行外表面消毒,消毒完毕后核对被检样本姓名、性别、年龄、编号等信息。
第三步,样本灭活
样本将在水浴箱经半小时56℃高温灭活,使病毒蛋白不再有生理活性,失去感染、致病和繁殖能力。这会让检测时相对安全,但病毒蛋白的基因序列并没有受到影响。
第四步,开盖加样和核酸提取
检测的核心环节,实验员拿到灭活后的样本时,第一个动作就是振荡,尽量让拭子上的病毒洗脱在培养基溶液中,再静置5分钟沉淀。接下来是开盖加样,必须人工操作,且需要两个人高度配合才能完成。一人拧开样本罐盖子,另一人拿着微量移液器在样本罐中吸取微量溶液,放到另一个提取管里,再拧上管盖。
酸提取可以使用仪器辅助,但由于比对需要,往往要加以人工操作,需要反复进行离心、加试剂、洗涤等10多个步骤。其中,需要打开管盖的操作就达7次以上,完成一例人工核酸提取要50分钟左右。
第五步,PCR反应体系配制
走出核心实验区,开始进行PCR反应体系配制,将提取的病毒核酸加入到核酸扩增检测试剂中。
第六步,核酸扩增检测
将配制好的PCR反应物放置在荧光定量PCR仪上。在电脑上设置PCR反应条件,运行仪器,开始核酸扩增检测。

第七步,检测完成
实时关注检测情况,大约1.5小时后,核酸扩增完成,进行检测结果判读。至此,该样本的新型冠状病毒核酸检测就算完成了,整个流程大概4小时。

还有最后一步,也是非常重要的一步,污染物的高压灭菌处理。实验过程产生的污染物通过高压灭菌后,按普通医疗垃圾处理。

(内容来源:网络 由小析姐整理编辑)

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