透射电镜收样要求及注意事项

一、组织样本：

(1)    组织固定，体积尽可能小，一般要求1 mm3大小，如果容易漂浮的组织样本，在管口用棉花塞住保证组织浸泡于2.5%戊二醛中，组织太大固定不充分，容易造成照片模糊或者结构溶解。

(2)    组织取材要迅速干脆，在几分钟内保存于戊二醛，保持结构完整性。

(3)    组织在戊二醛中4℃保存1个月以内进行实验，不要存放太长时间。

(4)    部分组织需要在电镜时定位，需要加收定位费，常规组织定位如：肾脏观察肾小球变化，肺组织观察特殊的细胞结构，脑组织定位CA1、CA2、CA3结构等。

二、细胞样本：

样本在收集后一定要肉眼可见方可进行实验，一般要求细胞量106以上。

(1)    贴壁细胞：弃去培养基，PBS洗涤3次，每孔加入1 mL 2.5%戊二醛固定1-1.5 h，固定完毕后，细胞刮轻柔的将细胞刮下，收集至1.5 mL离心管内，取5 μL在显微镜下观察细胞是否刮碎，如果细胞完整，则1000 rpm离心5 min收集细胞，加入1 mL新鲜的2.5%戊二醛重悬置于4度避光保存，一般保存1周进行实验。

(2)    悬浮细胞：细胞离心收集后，加1 mL 2.5%戊二醛混匀固定，4度避光保存。

三、微泡&外泌体

需要将微泡&外泌体分离出来，2.5%戊二醛重悬固定，2.5%戊二醛的量不要太多100uL-200uL即可，保证微泡&外泌体的浓度便于观察寻找。