显带染色体核型(二)
上一期已简单介绍了染色体显带技术的发展由来及A、B组染色体的形态特点(显带染色体核型(一)),本期将继续介绍染色体G显带操作流程及其它各组染色体的形态特点。
1、实验原理
G显带是指经Giemsa染料染色后,使染色体显带的技术。Giemsa染料由噻嗪和曙红组成,着色时DNA先与2个噻嗪分子结合,随后再与一个曙红分子结合,形成沉淀物,而DNA的某些部位对染料不敏感,由此形成明暗相间的条带。一般而言,Giemsa阳性显带(G深带,R浅带)富含AT,复制较迟,基因较少;Giemsa阴性显带(G浅带,R深带)富含GC,复制较早,基因较多。
2、实验用品
光学显微镜、恒温水浴箱、立式染色缸、染色体玻片标本(75℃中烤片2-3小时,未经染色)、0.5~1M氢氧化钠溶液、0.4%酚红溶液、生理盐水或 pH为7.4的1/15M磷酸缓冲液;胰蛋白酶:用生理盐水配成2.5%的贮存液,冰冻保存;Giemsa染色液:蒸馏水配成6%浓度,临用前配制。
3、实验用品
(1)将常规制备的人染色体玻片标本(未染色的白片)置70℃烤箱中处理2-3小时,转入37℃培养箱中备用,一般在第3~7天进行显带。
(2)取2.5%的胰蛋白酶储存液2.5ml加生理盐水至50ml,配成0.125%的工作液并用NaHCO/NaOH调pH值至7左右。
(3)将配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预热。
(4)将玻片标本浸入胰蛋白酶中,不断摆动,使胰蛋白酶的作用均匀,处理1~2分钟(精确的时间自行摸索)。
(5)立即取出玻片,放入生理盐水中漂洗两次。
(6)染色。将标本浸入37℃预温的Giemsa染液(1:10的Giemsa原液和pH6.8的磷酸缓冲液)中染色10分钟左右(精确的时间自行摸索)。
(7)自来水冲洗(用细水小心冲洗)、晾干。
(8)镜检显带效果。在低倍镜下选择分散良好的长度适中的分裂相转换油镜观察,若染色体未出现带纹,则为显带不足;若染色体边缘发毛为显带过头,此时应根据具体情况增减胰蛋白酶处理时间重新处理一张标本。
常见问题解析:
(1)火烧干燥法制得的标本对胰蛋白酶处理的抵抗力较空气干法标本强。
(2)标本保存的时间越长,细胞对胰蛋白酶处理的抵抗性越大。片龄很长的标本往往导致斑点状(而不是带纹)的染色体。
(3)胰蛋白酶处理时间不宜少于30秒钟。在摸索胰蛋白酶处理的时间时,可在同一玻片上分别摸索2-3个时间,经染色后即在镜下观察。如果细胞呈蓝紫色(与常规染色相似)说明胰蛋白酶的作用时间不够;如细胞的色泽为桃红色,方可。
6号染色体
口诀:老六小白脸,六号p似小白脸;特点:6号染色体(亚中) p中段为一明显宽阔的浅带,这是6号染色体的特征。远端和近端各有一条深带,后者紧邻着丝粒。在质量较好的标本可细分q有6条深带
7号染色体
口诀:老七瓶盖头,七上;特点: 7号染色体(亚中) p上有3条深带,末端一条较宽且色深,有如“瓶盖”,q有3条明显的深带,远端一条较浅,且可分为两条。
8号染色体
口诀:八姐脚细裙脚长,八下;特点:8号染色体(亚中) p最后一条深带宽浓,粗壮,两条深带被一条浅带隔开,这是8号染色体的特征;q有3-5条带,近侧段内带和末端较浅的一条带常不明显
9号染色体
口诀:九妹脖子细,九两条;特点:p有3条深带,远侧的两条深带有时融为一条。q有2条较亮的间隔均匀的深带,远端的一条有时一分为二,次溢痕不着色,长度变异大,但可用c带等选择性染色。
10号染色体
口诀:十妹肩宽脚不长,十号q三深带好;特点:10号染色体(亚中);p中段有1-2条深带,q有间隔基本均匀的3条深带。远端2条相距较近。近侧的一条着色最深。
11号染色体
口诀:十一露肚膛,十一低来;特点:11号染色体(亚中);着丝粒可能染色,p中央有一宽阔的深带有时再分出较窄的一条。着丝粒可能染色。q近着丝粒有一深带,中部有2条紧邻的宽阔的深带,后者常融合为一。
12号染色体
口诀:十二裙脚长,十二高;特点:12号染色体(亚中),p中部为一条深带,q近着丝粒有一深带,中段有一宽阔的深带,这两者之间有一明显的浅带。在较好的标本上中段宽阔的深带可分为3条。中间一条较宽,着色较浓。此外。在末端还可见另一条较窄的深带。
X染色体
口诀:X显示平衡带,Xpq一担挑;特点:其长度介于7号与8号染色体之间。着丝粒有时染色淡。p中段有一条明显的深带,宛如“竹节状”。在有些标本上其远侧还可见一条窄的、着色淡的深带。此臂分为2个区,中段的深带为2区1号带。q可见4条深带,近侧的一条最明显。此臂分为2个区,近侧的这条最明显的深带为2区1号带。