组织学技术 肠系膜铺片制作

巨噬细胞、肥大细胞、成纤维细胞、内皮和间皮、毛细血管

一、肠系膜铺片注射台盼蓝标本

⑴用大、小白鼠皮下或腹腔注射0.2~0.5%台盼蓝水溶液2~3毫升/次/公斤体重，每天一次，连续3~6天。

⑵取下皮下组织或肠系膜、大网膜，平铺在载玻片上，越薄越好。

⑶Helly液固定30~60分钟，流水冲洗1小时，70%酒精 加少量碘酒 加汞，5%硫代硫酸钠水溶液去碘，水洗；

酒精甲醛醋酸（AFA）液固定30~60分钟，水洗两次。

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⑷1%地衣红液染弹性纤维15~30分钟（37℃），流水洗，蒸馏水洗。

⑸Ehrlich苏木精染液5~10分钟，水洗。

⑹盐酸酒精分色，水洗至蓝色。

⑺伊红染液复染。

⑻95%酒精和无水酒精脱水各两次，每次各2分钟。

⑼用吸水纸吸干。

⑽二甲苯透明，中性树胶封片。

结果：细胞核蓝紫色；细胞质红色；巨噬细胞胞质内有蓝色的台盼蓝颗粒；成纤维细胞淡灰蓝色；胶原纤维红色；弹性纤维红褐色。

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⑶10%甲醛或甲醛酒精醋酸液（FAA）固定，水略洗。

⑷Weigert间苯二酚-碱性品红液染色弹性纤维5~10分钟，水洗。

⑸Van Gieson苦味酸-酸性品红液染胶原纤维1~3分钟，水洗。

⑹1%中性红水溶液（可加冰醋酸几滴）染5分钟。

⑺快速脱水 ，透明，封片。

结果：细胞质黄色；细胞核渡红色；红细胞黄色；巨噬细胞内含台盼蓝颗粒；肥大细胞颗粒呈深红色；胶原纤维品红色；弹性纤维黑紫色。

二、肠系膜铺片肥大细胞标本制作

三、肠系膜铺片成纤维细胞染色

铁矾苏木精染色法

⑴结缔组织铺片固定于AFA或Zenker液30~60分钟，水洗1小时。Zenker液固定者脱汞去碘。

⑵ 2%铁明矾水溶液媒染2~4小时（冬天37C温箱），蒸馏水速洗两次。

⑶0.5%苏木精液染色4~8小时（37C温箱1~2小时），流水洗。

苏木精液：10%苏木精无水酒精溶液100毫升加甘油5毫升，放置数周。用时取5~10毫升加蒸馏水洗至100毫升。

⑷2%铁明矾水溶液 分色至核蓝色、胞质淡灰蓝色（镜检）。

⑸流水充分洗，水中浸泡5分钟。

⑹入0.5%复制伊红酒精液或1%荧光桃红水溶液复染3~5分钟。

⑺95%酒精 及无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

结果：成纤维细胞和巨噬细胞核蓝色；细胞质灰至灰蓝色。

注：苏木精不宜深染，否则不易分色。

四、肠系膜铺片单层扁平上皮（内皮和间皮）

镀银法

⑴将蛙固定在蜡板上，从左心到注射生理盐水，右心房开一小洞，直到血液流净。

⑵注射0.5~1%硝酸银水溶液约20~30毫升，肠系膜毛细血管呈乳白色。

⑶取下肠系膜，用大头针固定在软木板上。

⑷放盛有蒸馏水（漫过肠系膜）的器皿置阳光下，至血管内皮呈棕黄色。

⑸经70%酒精、80%酒精，将肠系膜剥去，裸露血管。

⑹脱水至透明，封片。

结果：毛细血管内皮细胞深黄色。

肠系膜间皮镀银法

⑴杀死哺乳动物，放血，以小云母片绷在肠系膜下，连同云母片一起剪下。

⑵放在含0.5%硝酸银水 溶液内，在日光曝晒至棕色时取出，水洗。

⑶苏木精淡染，分色。

⑷连同云母片一起脱水、透明，最后剪民小块，置载玻片上加树胶和盖玻片。

结果：

间皮细胞边界为波纹状深票色或黑色；细胞核淡蓝紫色。

肠系膜 镀银前速用蒸馏水冲洗，避免多余的银深沉；冲洗稍多，致银盐不易沉浮而无法显示细胞边界。

五、肠系膜毛细血管标本制作

Wright染色法显示毛细血管

⑴剪取哺乳动物大网膜小片，在载玻片上展平，待干燥（30分钟，或用电吹风吹干）。

⑵无水酒精或酒精甲醛液（AF）固定10~15分钟。

⑶滴加Wright 液于载玻片上，盖满组织，染色5分钟。

⑷加等量蒸馏水混合，再染5~10分钟。

⑸蒸馏水漂洗分色至背景清晰为止。

⑹空气中干燥，用中性树胶或香柏油加盖玻片封固。

结果：管径最细、管腔最薄、无平滑肌的为毛细血管，内皮细胞核蓝色，腔肉有橘红色的红细胞；

管径粗、管壁外有螺旋形平滑肌包绕扩微动脉，平滑肌细胞术蓝色；介于二者之间，管壁上有分散平滑肌的为中间微动脉。偶或找到前毛细血管括约肌。

大网膜铺片显示毛细血管可将组织固定于Bouin液，用苏木精伊红染色。