组织学技术 火棉胶包埋切片、火棉胶石蜡双重包埋

一、火棉胶包埋切片  

火棉胶（Collodion）是火棉溶于乙醚酒精的浆胶。分干片和溶液两种。均属易燃品，应绝对避火。有两种形态：透明的块状物；絮状物。用时防吸水。有少量水分渗入即呈乳白色。

配制方法：称火棉胶4~5克、10克及15·20克，分别溶解于乙醚酒精（1：1）中。也可将火棉胶溶于无水酒精后再加等量的乙醚。存放于棕色的双瓶盖（一盖一塞）玻璃瓶，经常摇动。

（一）浸胶、包埋

组织块固定、脱水后，经无水酒精乙醚混合液透明，入4~5%火棉胶液、10%火棉胶液和15~20%火 棉胶液 浸胶处理。2*3*3毫米的组织，每级2天左右；3*5*5毫米组织，则需5~7天。再大的组织，所需时间更长，如人脑和胎儿整体标本，需半年以上。

火棉胶包埋的组织收缩较少，较大或较硬的组织或器官更易制作切片，如大脑、小脑、脑干，及易塌陷的器官如眼球、内耳等，均能得到满意的结果。

但火 棉胶包埋的缺点是浸胶很慢；难以制作较薄的切片'很难连续切片。

包埋过程：

⑴准备好木托，略大于组织块，外用内面涂有薄层凡士林的薄纸包成方筒形，托底的纸折叠封闭，避免火棉胶漏出。

⑵倒入切片用的火棉胶15~20%（较厚切片可用10%左右），在底部垫一小片用过的火棉胶块或其它切过的组织。

⑶入已浸好的组织块，切面方正。夹组织时，把长镊沾乙醚酒精 再夹组织，避免沾上过多的火棉胶，并用长镊将组织块放在垫的火 棉胶片上。

⑷确保火棉胶液盖满组织块。

⑸将包埋块（纸筒及组织托火棉胶块）放入小烧杯内。封于空的干燥器内（放有少量约5毫升乙醚）。一定时间后，火棉胶内的气泡上升至表面。

⑹打开干燥器的盖子，使残存的乙醚逸出。

⑺硬化火棉胶。将纯争 的氯仿倒入盛有组织托的小烧杯内（约五分之一），组织托底部放在盛氯仿的小烧杯内（托在下，组织 上）。

⑻盖上干燥器的盖子，并用凡士林封盖口。静置一天再开盖检查。如硬度不够，换新的氯仿或将组织托倒置于氯仿的烧杯内再放1~2天。

⑼夏天避免阳光直晒或室温过高。

⑽硬度以手指压后不出现指纹为宜。大块组织用10%火棉胶包埋。火 棉胶浓度高（20%），组织块小，较易制成薄片，甚至10微米的切片。

⑾已硬化的组织手连同底托（可剥去包的纸壳）放入70%酒精 内暂存。

附：加温包埋法

⑴ 70%酒精     2次    各30分钟   56 ℃温箱

⑵ 80%酒精    2次    各30分钟    56 ℃温箱

⑶95%酒精    2次    各30分钟   56 ℃温箱

⑷无水酒精    2次    各30分钟    56 ℃温箱

⑸乙醚酒精    1次    1小时    56 ℃温箱

⑹5%火棉胶液    1次    1小时    56 ℃温箱

⑺10%火棉胶液     1次    1小时    56 ℃温箱

⑻15~20%%火棉胶液    1次    12~24小时    56 ℃温箱

注意：防火 棉胶挥发；防燃爆。容器（瓶）要结实，瓶塞（盖）要牢固。

（二）火棉胶切片

在滑动切片机轨道上滴加液体石蜡或润油，使刀台和工作台能顺利运行。切片刀锐利，角度10度 以内。切片刀凹面向上，保留一些酒精，使切片易于平展于刀体上。

将火棉胶块固定在工作台上，调整方位，并将切片刀位置推到切片机远端，调整切片厚度，再将切片刀由远端向近端拉回，刀刃与组织接触时速度均匀，不可太快和加压力。最好是组织的一角先与刀刃接触，切后将切片用毛笔从切片刀上取下并保存于70%酒精内。

火棉胶切片常在切口处卷成卷，应在该片未切完前用毛笔将卷起的切片 切片刀上摊平，再将奉命部分切下。

中途停止切片，将切片刀了下，用酒精擦净后再涂少许油脂避免生锈。组织了下放入70%酒精 或酒精棉球覆盖，不能让火棉胶块干燥。切片后将切片机各处残留的酒精擦净并加油。

（三）火棉胶贴片

一般采取游离染色法：漂浮染色。

需粘片则用下列方法。

⒈蛋白甘油粘片法：将切片放在薄涂蛋白甘油的载玻片上，用滤纸沾干。加丁香油数滴，静置数分钟，再用滤纸沾去丁香油，经95%酒精及蒸馏水冲洗，即可染色。

⒉ 明胶粘片法：取明胶4克溶于冰醋酸20毫升，于65~70C水浴内加温溶化，加70%酒精70毫升及5%铬矾水溶液1~2毫升。将此液滴在载玻片上，干燥，形成一层明胶薄膜。遇水时明胶膜稍有溶化即产生一定粘性，将切片放上粘牢。

⒊火棉胶粘片法：切片从70%酒精移到载玻片上，用细针展平，滤纸吸干，在切片上薄涂0.5%火棉胶液，蒸馏水洗后染色。

二、火棉胶石蜡双重包埋

（一）苯甲酸甲酯火棉胶石蜡包埋法

⑴组织块固定水洗后，转入50%酒精、70%酒精、90%酒精脱水各2小时。

⑵无水酒精脱水2~16小时。

⑶苯甲酸甲酯火棉胶液24小时、48小时、72小时。

将固态火 棉胶1克溶于苯甲酸甲酯（Methyl benzoate）100毫升，不断摇动玻璃瓶使其完全溶解

⑷苯甲酸甲酯三次共4~12小时。

⑸等量苯甲酸甲酯石蜡液1小时。

⑹浸蜡两次，0.5~6小时（组织厚度。5毫米厚需3小时）

⑺常规硬蜡包埋。

（二）二氧陆环火棉胶石蜡包埋法

⑴组织块固定水洗，入二氧陆环（1，4-Dioxane）2小时。

⑵ 二氧陆环火 棉胶液3天。

⑶二氧陆环70毫升，2%火棉胶30毫升

⑷二氧陆环2小时。

⑸二氧陆环-石蜡（1：1）2小时。

⑹浸蜡3次：20分钟、30分钟、60分钟。

⑺常规石蜡包埋。

（三）火棉胶石蜡包埋法

⒈浸火棉胶：

⑴常规经各级酒精脱水，

⑵转入等量乙醚酒精透明（组织块大小），

⑶转入2~4%稀火棉胶液各36~48小时。

⒉用氯仿蒸汽硬化火棉胶块：

将浸胶的组织块转入无盖培养皿中，并向培养皿倒入相同浓度的稀火棉胶液，稍淹过组织块，将此培养皿连同装有氯仿的培养皿或小广口瓶一道放入干燥器内，加盖密封，放1~2小时，将火棉胶块翻转，再硬化1小时。火棉胶块完全硬化。

⒊修切火 棉胶块：

从培养皿中取出胶块，用解剖刀将其四周的火棉胶层修去，尽量接近组织。

⒋氯仿透明火棉胶块：

将修切的胶块逮入氯仿中24小时，换3次氯仿。将火棉胶组织块中的乙醚酒精全部排除，胶块在氯仿中下沉。

火棉胶块透明：苯透明；氯仿透明后用苯透明；氯仿透明。

⒌浸蜡：

当入熔点42~46℃软蜡2~#小时，再浸硬蜡30分钟 。

⒍包埋：

常规石蜡包埋。

注意事项：

①火棉胶浓度：2~4%；②氯仿透明：宜长不宜短，可长达48小时；③浸蜡时间：浸软蜡时间适当延长，48℃石蜡3小时，浸硬蜡30分钟不超过60分钟。

三、火棉胶切片苏木精伊红染色法

火棉胶切片不需将火棉胶溶去。从70%酒精取出，用蒸馏水洗即能染色。

染色后经各级酒精上行于95%酒精 ，用石炭酸（Carbolic acid）二甲苯或木馏油（Creosotum）二甲苯脱水、透明，用二甲苯洗两次洗净石炭酸。移至载玻片上，滴加树胶封固。

若火棉胶粘片，其脱水方法与石蜡切片相同。

⑴ 苏木精染色（如Delafield苏木精、Ehrlich苏木精、Hansen苏木精、Harris苏木精、Mayer苏木精）5~15分钟。(Zenker液固定的组织，染色时间加长）

⑵自来水洗去多余的染料。

⑷入0.5~1%盐酸70%酒精溶液或水溶液分色至核于红紫色、胶原纤维和肌组织及细胞质自来水洗或氨酒精至细胞核呈蓝色。

⑸蒸馏水洗去氨水。

⑹0.5~1%伊红水溶液或95%酒精 染数秒至数分钟。

⑺自来水洗去多余伊红染料，蒸馏水洗净。

⑻95%酒精 分色至胞浆、结缔组织等呈桃红色。

⑼95%酒精一次。

⑽无水酒精 脱水。

⑽冬青油透明，不必加盖玻片即可镜检；染色满意后，经两次二甲苯透明几分钟。

⑾取出切片，将组织周围多余的二甲苯擦去，滴加树胶加盖玻片封固。

四、火棉胶石蜡双重包埋切片苏木精伊红染色法

与石蜡切片染色相同。

⑴ 切片粘于载玻片上，烘干。

⑵二甲苯两次将硬蜡脱净。

⑶经无水酒精及各级酒精下行至水。

⑷蒸馏水或自来水略洗。

⑸苏木精染色（如Delafield苏木精、Ehrlich苏木精、Hansen苏木精、Harris苏木精、Mayer苏木精）5~15分钟。(Zenker液固定的组织，染色时间加长）

⑹自来水洗去多余的染料。

⑺入0.5~1%盐酸70%酒精溶液或水溶液分色至核于红紫色、胶原纤维和肌组织及细胞质自来水洗或氨酒精至细胞核呈蓝色。

⑻蒸馏水洗去氨水。

⑼0.5~1%伊红水溶液或95%酒精 染数秒至数分钟。

⑽自来水洗去多余伊红染料，蒸馏水洗净。

⑾ 95%酒精 分色2次 至胞浆、结缔组织等呈桃红色。

⑿无水酒精 脱水两次。

⒀冬青油透明，不必加盖玻片即可镜检；染色满意后，经两次二甲苯透明几分钟。

⒁取出切片，将组织周围多余的二甲苯擦去，滴加树胶加盖玻片封固。

结果：细胞核蓝色、紫色至黑色；胶原纤维、肌纤维、嗜酸性颗粒桃红色；细胞浆桃红色；弹性纤维明亮桃红色。