CHO细胞基因敲除构建技术原理

CHO细胞是生物制药工业生产复杂药物蛋白的首选宿主，CHO 细胞的基因组工程将有利于产品产量和稳定性。Long等人通过在Dnmt3a中产生位点特异性的基因断裂来验证Dnmt3a 的敲除对基因长期表达稳定性的影响，该基因编码涉及DNA甲基转移酶的蛋白质。将稳定转染CMV或EF1的3a-30和CHO-K1细胞的多克隆α在有（G418+）或无（G418-）的选择压力下通过中60段。检测10、20、30、40、50和60代细胞的MFIs，判断EGFP表达强度。无论是否存在G418，转染CMV的Dnmt3a缺陷型3a-30细胞系表现出最稳定和最高的表达水平（图1）。稳定转染EF1的3a-30和正常CHO细胞的转基因表达水平α 在长期培养过程中表现出生产力的损失。结果表明，基于Dnmt3a敲除的Dnmt3a 缺陷型CHO细胞系在超过60代的转染细胞中，在 CMV 启动子的控制下，表现出增强的转基因表达的长期稳定性（图1B）^[4]。

图 2 Dnmt3a 在野生型 (WT) 和敲除 (KO) CHO-K1 细胞中的表达水平。