如何系统全面的评价qPCR仪
本文是之前的文章《教你核酸检测实验室如何评价荧光定量PCR仪》的补充升级版。也以此鼓励一下居家隔离的自己和我的同事朋友们，至少大家实在太无聊的时候还可以看看我的公众号。
荧光定量PCR的检测离不开荧光定量PCR试剂和荧光定量PCR仪器。试剂的评价前面已经讲了（诊断试剂评价系列2-核酸检测方法（更正））。但是每次提到荧光定量PCR仪的评价，大家总是望而却步。一方面原因是荧光定量PCR仪涉及很多温度、光电信号需要专业的设备来评估，另一方面也确实不知道从哪里入手。今天我梳理一下评价荧光定量PCR仪的指标和方法。由于本人非计量相关专业，文中可能存在错误，本文仅供参考，大家可以参照相关标准进行评价。
一、荧光定量PCR仪评价的核心指标
二、荧光定量PCR仪的温度性能试验相关指标
通过物理方法测定PCR性能的试验。主要包括测定温度和荧光来进行评价，由于需要专业的设备，建议联系计量部门或仪器厂家进行相关指标的测定。
温度示值误差：
编辑并运行一个温度循环文件，在55±5℃，72±5℃，95±5℃各取一个温度点，设置恒温2min，测定值与设定值应不超过±0.5℃。
温度均匀性：
编辑并运行一个温度循环文件，在55±5℃，72±5℃，95±5℃各取一个温度点，设置恒温2min，5次循环，随机选取≥6个点位。温度差值在±1℃范围内。
(图片由北京林电伟业电子技术有限公司提供 )
温度最大过冲量：
荧光定量 PCR 仪均热块温度升高或降低至设定值过程中，所有采样测量孔温度超出设定值的最大幅度，应≤3℃。过冲时间和过冲温度体现了qPCR仪器的性能，对qPCR实验程序的影响巨大，后面会用实验来说明过冲的影响。
(图片由北京林电伟业电子技术有限公司提供 )
温度持续时间准确度：
编辑并运行一个45℃和95℃之间循环的文件，设置温度≥1min，连续记录5个循环，温度持续时间与设定温度时间偏差在±5%以内。
平均升温速率：50℃-90℃应不小于1.5℃/秒。
最大升温速率：50℃-90℃应不小于2.5℃/秒。
平均降温速率：90℃-50℃应不小于1.5℃/秒。
最大降温速率：90℃-50℃应不小于2.0℃/秒。
三、荧光定量PCR仪的荧光性能试验相关指标
通过物理方法测定PCR性能的试验。主要包括测定温度和荧光来进行评价，由于需要专业的设备，建议联系计量部门或仪器厂家进行相关指标的测定。
9.荧光强度检测精密度
随机选取10个及以上个检测孔，用高中低浓度校准染料进行检测，各浓度校准染料重复测定的变异系数≤5%。
10.荧光强度检测重复性：
用高中低浓度校准染料各随机选择1个孔，重复检测10次，各浓度校准染料重复测定的变异系数≤3%
11.不同通道荧光干扰
随机选择≥2个通道，配置非目标通道的荧光染料溶液，其他通道荧光检测强度不高于目标通道荧光阈值。