液相色谱系统的许多问题都可以在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键所在。
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4.调整pH值,对于碱性化合物,低pH值更有利于得到对称峰;
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5.a.加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂。b.更改色谱柱。
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1.取下保护柱再进行分析;如果必要更换保护柱;如果分析柱阻塞,拆下来清洗;如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施;如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。
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2.改变样品溶剂;如果可能采取流动相作为样品溶剂;
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1. a.调整系统连接(使用更短、内径更小的管路);
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1.柱温波动;(即使很小的温度变化都会引起基线波动;通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器;)
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1.控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器;
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2.流动相不均匀;(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移)
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2.使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂;流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气;
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3.用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池;如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用盐酸)
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4.检测器出口阻塞;(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)
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4.取出阻塞物或更换管子;参考检测器手册更换流通池窗;
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5.更改配比或流速;为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速;
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6.用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10~20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗;
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7.检查流动相的组成;使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂;
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8.样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。
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8.使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。
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9.重新设定基线;当检测器动力学范围发生变化时,使用新的流动相;
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1.流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气;
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2.见第三部分;检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封。
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5.断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。
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1.见第三部分。检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封。检查流通池是否漏液。
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7、流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。)
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10.维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,建议不使用泵的混合装置
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3.见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。
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a.小体积进样(例如:10μl而不是100μl)以1:10或1:100的比例稀释样品
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8.更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰,则用强溶剂冲洗旧柱子。
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2.去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞,可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏,建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在,进口可能阻塞了,更换入口处的筛板或更换色谱柱。
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