蛋白交联剂-碘乙酸 N-羟基琥珀酰亚胺酯/琥珀酰亚胺基 4-叠氮基苯甲酸酯
蛋白交联剂-碘乙酸 N-羟基琥珀酰亚胺酯/琥珀酰亚胺基 4-叠氮基苯甲酸酯
蛋白交联剂-碘乙酸 N-羟基琥珀酰亚胺酯/琥珀酰亚胺基 4-叠氮基苯甲酸酯
常见蛋白交联剂：
常见：
DSS（双琥珀酰亚胺辛二酸酯）
描述：
Thermo Scientific Pierce DSS（也称为双琥珀酰亚胺辛二酸酯）是不可裂解的膜可穿透性交联剂，在 8 个碳原子间隔臂的每个末端有一个胺反应性 N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 酯。
NHS 酯在 pH 7-9 条件下与伯胺反应可形成稳定的酰胺键，同时释放 N-羟基琥珀酰亚胺离去基团。蛋白（包括抗体）通常在赖氨酸 (K) 残基的侧链和每个多肽的 N 端有若干伯胺，这些伯胺可用作 NHS 酯交联试剂的靶标。DSS 先溶解在有机溶剂（如 DMF 或 DMSO）中，然后添加到水性交联反应中。DSS 的水溶性类似物 BS3 也适用于需要亲水性交联剂（例如为了产生细胞表面交联）的应用。DSS 和 BS3 对于伯胺的交联活性基本相同。
二琥珀酰亚胺的特点：
·反应性基团：NHS 酯（两端）
· 可与以下基团发生反应：氨基基团（伯胺）
· 胺反应性磺基-NHS 酯与任何含伯胺分子迅速反应
· 膜可穿透性，可进行细胞内交联
· 高纯度结晶试剂可用于生成高纯度偶联物
· 不可裂解
· 水不溶性（先溶于 DMF 或 DMSO 中）；与 BS3（磺基-DSS）比较
应用：
· 细胞裂解和免疫沉淀前细胞内蛋白的化学交联
· “固定”蛋白相互作用，以便识别较弱或瞬时的蛋白相互作用
· 蛋白交联通过单步反应生成生物偶联物
· 将蛋白固定到胺包被的表面上
Sulfo-SMCC (sulfosuccinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate)
描述：
Thermo Scientific Pierce Sulfo-SMCC是水溶性的氨基-巯基交联剂，在中等长度的环己烷间隔臂（8.3埃）两端分别包含了NHS酯和马来酰亚氨基反应基团。
Sulfo-SMCC的特性：
· 反应基团: sulfo-NHS酯 和 马来酰亚胺
· 反应性:在氨基与巯基之间发生
· （相比SMCC）具有水溶性，可以在生理溶液中实现交联
· 高纯度晶体试剂可用于生成高纯度马来酰亚胺激活衍生物
· 环己烷桥为马来酰亚胺基团赋予了额外的稳定性，这使得Sulfo-SMCC成为马来酰亚胺激活蛋白的理想交联试剂。4°C、pH7的条件下，马来酰亚胺基团在0.1 M磷酸钠缓冲液中可稳定保存64小时。
磺基琥珀酰亚胺基-4-（N-马来酰亚胺甲基）环己烷-1-羧酸酯(Sulfo-SMCC）是不能切割，不具膜通透性的交联剂，包含一个胺反应性的-羟基琥珀酰亚胺（NHS酯）和一个巯基反应性马来酰亚胺基团。NHS酯能够在pH7-9的条件下与伯胺基发生反应，形成稳定的酰胺键。马来酰亚胺能够在pH6.5-7.5的条件下与巯基发生反应，形成稳定的硫醚键。由于间隔臂中含有环己烷桥，Sulfo-SMCC和SMCC的马来酰亚胺基团甚至在pH7.5条件下都具有极好的稳定性。由于含有疏水的磺酰基团，Sulfo-SMCC在水及许多常规缓冲液中的溶解度能达到10mg/mL左右，这就避免了有机溶剂可能对蛋白结构造成的损害。
应用：
· 抗体的酶标记 - 同时保留酶与抗体的特异性
· 通过一步或两步交联反应生成特异生物偶联物
· 生成巯基反应性、马来酰亚胺激活的载体蛋白，用于结合半抗原
规格：
Sulfo-SMCC按照较高生产规格制造，能够生成较特异的生物偶联物和马来酰亚胺激活蛋白，进而确保数据的完整性，并为您提供较高水平的交联一致性。每一批次的Sulfo-SMCC均经过测试，符合以下较低标准。
· 均一度：IR扫描只显示Sulfo-SMCC交联剂结构和功能性基团的峰值属性
· 纯度：定量NMR检测纯度≥ 90%（交联剂纯度的较高标准）
· 可溶性：去离子水中含量≥ 10 mg/mL
DSP（二硫双(琥珀酰亚胺丙酸酯)）、Lomant 试剂
描述：
Thermo Scientific Pierce DSP（Lomant 试剂）是水不溶性、同型双功能 N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS 酯）交联剂，具有硫醇可裂解性、伯胺反应性，适用于多种应用。DSP 在 8 个碳原子间隔臂的每个末端有一个胺反应性 NHS 酯。NHS 酯在 pH 7–9 条件下与伯胺反应可形成稳定的酰胺键，并释放 N-羟基琥珀酰亚胺。蛋白（包括抗体）通常在赖氨酸 (K) 残基的侧链和每个多肽的 N 端有若干伯胺，这些伯胺可用作 NHS 酯交联试剂的靶标。DSP 是非磺化的且不溶解在水中，因此必须先溶解在有机溶剂中，然后再添加到水反应混合物中。由于 DSP 不具有带电的基团，它具有亲脂性和膜可穿透性，因此可用于细胞内和膜内偶联。DSP (DTTSP) 的磺化类似物具有水溶性。如果相关的应用需要一个在还原剂条件下不能裂解的稳定间隔臂，也可使用 DSP 交联剂的不可裂解类似物 DSS。
Thermo Scientific No-Weigh 是以预分装规格提供的专业试剂。预称重的包装可消除重复开瓶和关盖，从而防止随时间推移导致的试剂的污染和反应性的降低。对于这种规格，可每次使用一小瓶新鲜试剂，消除了对少量试剂进行称重的麻烦，并减少了对试剂稳定性的担忧。
DSP 在 8 个碳原子间隔臂的每个末端有一个胺反应性 N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 酯。NHS 酯在 pH 7-9 条件下与伯胺反应可形成稳定的酰胺键，同时释放 N-羟基琥珀酰亚胺离去基团。蛋白（包括抗体）通常在赖氨酸 (K) 残基的侧链和每个多肽的 N 端有若干伯胺，这些伯胺可用作 NHS 酯交联试剂的靶标。如果相关的应用需要一个在还原剂条件下不能裂解的稳定间隔臂，也可使用 DSP 交联剂的不可裂解类似物 DSS。
Lomant 试剂的特点：
·反应性基团：NHS 酯（两端）
· 可与以下基团发生反应：氨基基团（伯胺）
· 胺反应性磺基-NHS 酯与任何含伯胺分子迅速反应
· pH 值 8.5 时，间隔臂中的二硫键易被 10-50 mM DTT 或 TCEP 裂解
· 间隔臂也可被还原 SDS-PAGE 上样缓冲液裂解
· 可裂解交联剂能够分离交联产物
· 水不溶性（先溶于 DMF 或 DMSO）；与 DTSSP (Sulfo-DSP) 具有可比性
· 具有膜可穿透性，可用于细胞内交联
应用：
· 细胞裂解和免疫沉淀前细胞内蛋白的化学交联
· “固定”蛋白相互作用，以便识别较弱或瞬时蛋白相互作用
· 固定组织进行免疫染色而不损坏 RNA
· 进行蛋白交联，以通过单步反应产生生物偶联物
· 将蛋白固定到胺包被的表面上
DSP 的属性
· 其他名称：Lomant 试剂，DTSP
· 分子式：C14H16N2O8S2
· 分子量：404.42
·间隔臂长度：12.0Å（8 原子）
·CAS 号：57757-57-0
· 反应基团：NHS 酯，与伯胺发生反应，pH
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