ASTM E 3219-2020，新的清洁验证标准发布！

近日，ASTM发布了E 3219-20《 基于健康的接触限值（HBEL）的推导》指南，该指南描述了计算和记录基于健康的接触限值(HBEL)的通用指南，适用于清洁验证和清洁确认过程中API(包括生物制品)、中间体、清洁剂、辅料和其他化学品(即试剂、生产残留物等)的HBEL。范围包括生产设备和医疗器械表面的清洁和交叉污染，但不包括可吸附物/可萃取物。该指南也可用作制定职业接触限值的依据。同时，该指南也适用于兽药产品的生产。

该指南对HBEL计算过程描述的详细程度，堪称史上最全面！

指南给出评估HBEL的步骤：(1)危害特性，(2)识别关键反应，包括剂量-反应评估，(3)确定一个或多个参考点(PoD) s，(4)应用 PoD 的特定AFs，(5)计算 HBEL，包括所选择的HBEL 的论证。详见下图：

关于HBEL评估人员的资质要求：

指南指出，HBEL的建立是一个需要专门知识的过程，需要由有资质的专业人员进行，如有可能，应由相关主题专家进行同行审查。

用以说明推导HBEL程序的文件应由具备资质的专家在专论中加以说明。专题论文的目的是与利益攸关方进行有效沟通，并记录作为产生 HBEL 的基础的科学数据和方法，以便监管机构能够对其进行检查。

EMA和PIC / S也提出关于HBEL评估专家的要求：

“基于健康的接触限值应由在毒理学/药理学方面具有足够专业知识和经验，对药物熟悉并且具有确定基于健康的接触限值（例如职业接触水平（OEL）或每日允许摄入量）经验的人来确定（PDE）”。

另外，关于使用外部毒理学顾问，EMA和PIC / S还要求：

“如果与专家签订合同以提供HBEL，则在进行工作之前应已达成符合GMP第7章要求的合同协议。对于制造商“购买” HBEL评估而不记录对HBEL适用性的评估，不被认为是可以接受的。提供者（包括特定的技术专家）作为合格的承包商”。

对于HBEL的评估的资格应包括：

• 应要求提供可证明其教育背景的履历（例如，毒理学，药理学，医学或其他与健康有关的学科）

• 在该领域的多年经验

• 多年积累HBEL的经验

以下专业信息也可能会有用：

• 诸如美国毒理学委员会（DABT）或欧洲注册毒理学家（ERT）的证书

• 与该领域有关的出版物。

拥有认证和/或出版物并不能直接证明其在HBEL推导中的能力。但是，认证注册机构通常需要相关学科的学位，毒理学主要领域的基础知识，至少五年的相关毒理学经验，是否适合注册（例如，通过发表的作品，报告或评估），以及目前从事毒理学实践的专业人士。因此，拥有证书确实可以支持资质要求。

尽管“合格专家”并不需要所有上述条件，但是有关这些领域的适当文档证明了拥有在该领域工作所需的专业知识。

关于文献检索和危害识别：

指南给出Klimisch评分规则用于对不同文献的可靠性评分。建议用于得出关键影响的研究（文献）的Klimisch分数应为1（可靠无限制）或2（可靠有限制）。如果使用Klimisch得分为4（可靠性无法分配）的数据，则应提供理由。不应使用Klimisch得分为3（不可靠）的数据。除原始研究外，可以使用从高度可靠的研究中提取信息的辅助数据源（例如在产品包装说明书，研究人员手册等中找到）来识别关键反应。ToxRToolExcel电子表格是使用Klimisch标准（32）评估研究并对其可靠性进行评分的有用工具。

有关危害界定的文献搜索应由毒理学家或其他有资质的风险评估专家进行或审查。一个合格的专家可以根据化合物的类型(数据丰富或数据匮乏)有效地确定文献检索策略。有资质的专家还可以确定数据空白出现在哪里，并可以尝试获得数据，尽可能填补空白(例如，交叉阅读、作用机制等等) ，使用诸如毒理学关注阈值（TTC），或者由于缺乏数据导致不确定性增加而应用更大的AF（18）。理想情况下，使用高质量的临床数据集，并应进行评估，为在大多数不利健康影响终点(人类发育不良和生殖毒性，致癌性除外)方面，它们通常比非临床研究更适用于人类 HBEL 的计算。

在没有NOAEL的情况下，如何评估HBEL？

在评估某些较老的非专利药时存在的一个差距是原始数据的可获得性。在许多情况下，只能得到一个摘要，没有关于在非临床和临床试验研究中确定的NOAEL，给药途径或剂量的详细信息。在无法获得非临床和早期临床试验数据的情况下，人类数据(例如，后期临床试验、上市后监测/药物警戒以及偶尔的病例报告)可用作PoD，因为在批准后的这些年中，可能有适当数量的患者和患者群体得到了治疗。在这些情况下，根据用于治疗人类患者的临床剂量选择PoD就足够了。但是，必须注意的是，是否已查明易感亚群，或是否故意将其排除在治疗之外(例如，由于发育毒性问题，可能生育的妇女)。

NOAEL方法的局限性：

指南指出NOAEL方法推导HBEL的局限性：

• NOAEL值的确定受测试剂量的限制；

• NOAEL可能无法代表真实的0％反应（也就是说，由于样本量的考虑，研究可能没有足够的能力来检测不良影响“信号”）；

• NOAEL高度依赖样本量；

• NOAEL并非总是可用；

• 它没有考虑剂量反应曲线或数据变异性。

在可行的情况下，基准剂量（BMD）方法比传统的NOAEL / LOAEL方法更可取，因为它可以纠正这些不足。BMDL通常被认为等同于NOAEL。BMDL取决于基准反应（BMR），该基准反应基于研究的敏感性，在许多情况下，BMR被认为比作用背景高出10％。BMD的目标是使模型适合剂量反应数据，并且它是用于推导HBEL的NOAEL评估因子方法的可接受替代方案（42，49）。

该指南使用PoD代替NOAEL用于HBEL的计算：

PoD =参考点

F T  =综合调整因子

PK-AF =累积因子

α=接触途径的生物利用度

此外，增加药代动力学调整因子(PK-ABS)：

PK-ABS（吸收因子）用于校正研究中使用的PoD所来自的接触途径与被评估人群中接触途径之间的吸收差异(65)。式1可用于确定。

关于给药计划的影响：

在进行 HBEL 推断时，应考虑药物的典型给药计划。对于每天至少给药两次的API，HBEL 表示为人类每日总治疗剂量。然而，必须考虑单剂量(Cmax 介导效应)对急性健康的潜在影响，因为单剂量可能具有临床相关反应，这是关键反应。对于一次给药间隔大于一天的API(例如，常规给药计划，如生物制品和一些小分子常见的每周一次或每月一次) ，一般可以使用按比例分配的每日剂量(即单剂量除以每次给药之间的天数)。对于并非长期给予个别病人服用，而是临时服用的API(例如接种疫苗、外科手术或某些医疗程序) ，应根据现有数据评价PoD，并适当合并AF以反映潜在的长期暴露，以推导HBEL。在这些情况下，或者在给药计划是间歇性的或其他情况下，PoD并非处于稳定状态下的剂量，可以使用PK AF代替每日平均剂量。在适用的情况下，也可以使用PK或PD作为PoD的日剂量或药理无效剂量的推导（18，50）。

体重的考虑：

体重和其他给药参数(例如，局部用药的体表面积)可能会根据评估的接触途径和监管管辖范围而改变。对于一般人群，所使用的体重可以保守地设定为一个体重50公斤(14,29,51,52)的小型成年人。其他司法管辖区可能对成人和不同的儿童使用替代值(53-56)。欧盟药监局(EMA)已经声明“极限的推导需要考虑到给药的剂量，这将受到待治疗物种的体重的影响”(14)。如果要评估其他人群或接触途径(例如婴儿) ，请参考适当的参考资料(53-56)。在一份草案文件中，EMA建议考虑三个儿童人群的体重值: 早产儿0.5公斤，新生儿3.5公斤，儿童10公斤(57)。

关于体表面积的考虑：

关于体表面积，环保署的指南提供了儿童和成人体表面积的平均值和第95百分位数的估计值((56) ，表7.1)。成年人的平均体表面积约为2平方米(20000平方厘米)。FDA 假设一个体重60公斤的成年人的体表面积为1.62平方米，因此，一个体重50公斤的成年人的体表面积为1.35平方米(58)。

蛋白质疗法的特殊考虑：

对于某些蛋白质疗法，指南可用于首次人体临床试验(FIH)剂量选择，它代表预计不会产生临床反应的剂量(59-61)。这包括通过 PK/PD 模型估计最小预期生物效应水平(MABEL)。在收集临床数据之前，FIH 剂量可作为替代 PoD。

关于如何选择AF（F值），给出详细指导！

F1，物种间推断

只要有可能，就应该使用有关人类的数据，从而避免因跨物种推断而带来的其他不确定性。当有效的人类数据不可用或不足时，可以从动物研究中选择PoD。当从动物研究中选择PoD时，F1 AF解释了从动物到人的种间推断。

F1因子取决于物种和PoD。关于小分子[ICH Q3C（R6）]的物种间推断，有一些指导性文件可用（58，69，70）。种间推断的首选方法的推荐层次结构是，首先依赖药理学-药代动力学数据，其次依赖于化学特异性数据（70）。但是，通常这些数据不可用，因此，第三条建议是依靠经验得出的比例因子（70）。一些重要的代谢和生理功能会按体重缩放至四分之三的功率（BW3 / 4），因此，通常将基于BW3 / 4的异速生长比例因子用作种间推断物种的默认值（70） 。但是请注意，尽管该因素适合预测> 5岁的儿童和青少年的清除率，但对于≤2岁的儿童，它会产生大量的预测误差，尽管最近有一个早产至2岁儿童的预测模型已开发（71-73）。也可以使用常规方法，其中直接比较AUC可以消除动物和人之间对PK调整因子的需要。同样，存在针对蛋白质疗法的种间调整的指南（74-76）。

虽然 ICH Q3C 建议其他动物 F1 = 10，但其他物种的 F1系数也可以通过计算相对体表面积：物种与人类的体重比来计算。表面的计算方法如下：

注：

M=体重

k=常数10

F2：个体间变异性、种内变异性和人类变异性

此因素，也被称为人际变异性，解释了被评估的种群内的变异性。对于一个给定的化合物，PK 和 PD 的反应取决于个人。年龄、性别、妊娠、总体健康、营养、药物相互作用、代谢相关因素或遗传因素都可能影响个体的暴露和药理或毒理反应，因此在此AF中予以考虑。历史上，风险评估中使用默认因子10来解释个体之间的变异性(对敏感人群的平均值)(62,63,77)。

应针对可能包括儿童在内的敏感人群开发HBEL。但是，HBEL也适用于体重为50公斤的成年人，这对于儿童而言并不适合。在大多数情况下，为体重极低的新生儿开发HBEL是不切实际且不必要的。因此，建议在后续产品会向儿科人群使用的情况下，将该调整作为后续产品HBEL的一部分进行。

F3：暴露时长 AF，亚慢性至慢性

亚慢性到慢性AF（F3）是指随着暴露持续时间的增加（例如，从短期到慢性期），在较低剂量下可能产生不良影响的可能性。它还假设某些影响只能在较长的暴露持续时间才能看到（也就是说，某些影响可能不会在较短的持续时间研究中表现出来）。它考虑的不确定性是，如果进行了较长时间的研究，是否可能存在较低的无效水平（在较低剂量下具有相同的关键效应，或在较长时间的暴露后才观察到的另一关键效应）。当应使用亚慢性研究建立HBEL并假设将来会长期暴露于该化合物时，可以将额外的AF应用于NOAEL亚慢性以预测NOAEL亚慢性。

如果PoD来自人体试验，则 F3因子取决于临床试验/经验的持续时间。如果药物随着时间的推移而累积并逐步观察到反应类型(例如，急性反应与慢性反应)，这一点尤为重要。动物的长期给药经验也可以帮助预测在长期暴露条件下对人类的潜在影响。如果已经应用了药物累积因子（PK-AF），则在推导F3因子时应加以注意，以避免使用多个AF来达到相同的效果。对于长期服用标示为慢性适应症的药物，通常不需要针对临床剂量（PoD）进行F3调整。

如果在亚慢性研究中，随着研究时间的延长，预计不会出现低于无可见不良作用剂量的影响，则可能没有必要使用这一因素。评估治疗持续时间较长是否会出现较低的 PoD 的一种方法是比较不同持续时间的研究中的 PoD 的比例，然后检查 PoD 是否随着时间的推移而降低，还是随着剂量的增加而出现的新的关键反应。了解目标类别会影响 F3的选择。如果为其设置 HBEL 的物质的相关数据不可用，来自同一目标类别的数据评价可能会影响所使用的 F3值。有多个指导文件讨论了研究持续时间的适当调整因子的选择[ICH Q3C（R6）]（14，69）。

在科学论证和专业判断的情况下，也可以偏离5.9.3.3中关于 F3选择的指导。

F4：反应的严重程度，严重程度

本系数用于解释 PoD 之外的其他不确定性，如反应的严重程度、缺乏数据(生殖和发育毒性)或数据的质量。EMA (14)建议使用一个因子(1-10)评估严重毒性(例如，非遗传毒性致癌性、严重神经毒性或致畸性)。

总体而言，应在评估中考虑使用F4以确定对人类健康有潜在潜在的不利影响，例如致癌，遗传毒性，致畸性，不可逆转或威胁生命或两者并存，并会损害生活质量。但是，如果在所讨论的严重影响的NOAEL和PoD之间确定了可接受范围，则这是不使用F4的合理理由。当由于有限的数据或未完全理解的ADME参数而导致高度不确定性时，也可以使用此因子。仅在不确定性或关注点未在计算中的其他地方（由其他AF）解决且合理性充分合理的情况下，才应使用F4。

如果使用了更大的LOAEL到NOAEL AF，该AF被认为足以覆盖影响的严重性，则无需使用F4。

当考虑严重的影响时，如果该影响的PoD是基于人类的NOAEL，使用F4调整可能是不必要的。如果该影响的 PoD 基于动物数据，那么如果对人类的影响（例如，发育或生殖毒性）没有得到充分评估，则可能需要进行 F4 调整。

如果PoD是来自严重影响的NOAEL，然而，PoD不是来自人类和物种差异可能不涵盖LOAEL AF，F5，那么 F4调整是必要的。

评价使用 F4值的一些考虑因素与PoD何时可能造成影响有关。例如:

• 高度关注的影响包括致突变性、致癌性、严重的不可逆转效应(例如，靶器官上或靶器官毒性、生殖(不育)、胚胎(致畸)毒性或其组合) ，或生物死亡: 10;

• 可逆的，非致命的不良健康结果(例如，靶器官疾病，生殖(增加怀孕时间)，或发育毒性(可逆的，功能改变) : 3-5;

• 适应性，轻度/可耐受的临床不良事件，应激相关效应; 初级/次级药理学: 1; 和

• 根据专业判断提出的严重性:1–10.

F5：LOAEL到NOAEL推断

这个因素解决了当没有NOAEL 可用于 HBEL 计算的关键研究。将 F5应用于 LOAEL，目的是估计NOAEL。选择 F5时要考虑的因素包括关键研究中剂量反应曲线的斜率、影响的严重程度以及给药间隔。如果可获得 BMDL ，这通常被认为是 NOAEL，不需要 F5。

当使用人类数据时，往往在治疗剂量及其附近有丰富的药理学/毒理学数据。早期临床试验可以研究亚治疗剂量，并提供有关药物合成和毒理效应的剂量-反应信息。肿瘤产品剂量通常达到或接近最大耐受剂量，一般会引起重大毒性。因此，可以使用 F5的值为10或10以上。如果观察到剂量反应效应，且反应接近背景，则可以使用较低的因子，如3。

高致敏性物料专用设施：

根据GMP准则，'高致敏性物料'需要专用设施（21 CFR 211.42（d）、211.46（d）和211.176（28、121、122）。青霉素类和其他β-内酰胺是迄今为止唯一被认为有必要使用这种设施的药物。在GMP环境中，如果有确凿证据表明其致敏性（可能性和严重性）与青霉素等β-内酰胺相当或更差，应被视为一种致敏剂。

HBEL计算的例外情况：

在某些情况下，例如用于早期临床试验的中试工厂，已知该设施中所有化合物的暴露持续时间只会很短。在那种情况下，可能会对该设施中的产品HBEL进行修改，例如将TTC提高十倍，以说明临床试验中有限的暴露时间（120）。

清洁验证对象，不仅仅是“活性成分”！

不应仅仅简单地选择原料药和清洁剂用于清洁验证HBEL的计算。应考虑到在产品的制造和清洗过程中所使用的所有化学品对患者构成危险的可能性。清洁剂，辅料，可萃取物，可吸附物，和其他化学药品用于处理原料药可能需要考虑的 HBEL 计算。例如，辅料是配制药品的非药效成分，但可能对其他药品造成危害(例如，新生儿接触苯甲醇)。应采取步骤，筛选和确定可能对患者安全产生不利影响或影响产品质量的潜在化学危害，并确定这些潜在化学危害中哪些应计算 HBEL。

起始物料（SM）或中间体（IM）的残留风险：

如果在一个生产设备上使用起始物料（SM）或中间体（IM），就有可能与其他潜在产品交叉污染，最终可能成为 API 中的残留物，特别是当SM 或 IM 与 API 共用设备时。

起始物料（SM）和中间体（IM）的毒性数据通常有限，因此，TTC 适用于其 HBEL。对于从毒理学或药理学角度考虑，风险较低的 SMs 和 IMs，HBEL 可以保守地设置为 100 μg/天。如果 SM 和 IM 的药理学与制造的 API 类似，则 HBEL 可以设置为 HBEL 或 API 的分数（取决于药理学数据）。最后，对于具有诱变性等毒性的化合物，应使用适当的 TTC（例如，对于终身使用的诱变性化合物：1.5 μg/天，对于强效/有毒化合物：10 μg/天）。

关于清洁剂残留：

长期以来，监管一直期望在清洁验证中测试清洁剂残留（129）。为了满足此要求，需要制定此测试的可接受标准。多年来，为清洁剂设定接受限的方法一直基于 LD50 的分数（1/100 000 到 1/1 000 000）。在许多情况下，这些方法产生了过低和无法达到的限度，甚至导致在清洁过程中无法使用清洁剂。更合适的方法是计算这些化合物的HBEL（130）。

清洁剂的研究不像药品那样广泛，因此关于防止 HBELs 的数据要少得多。一些清洁剂可能是有专利的，完整的化学成份可能无法获得。然而，大多数清洁剂是化合物的混合物和他们的许多组分已经研究得很好。因此可以确定这些组成部分的HBEL，许多组成部分已经有现有的安全评估和风险评估。在计算清洁剂组分的 HBEL 之前，应确定此类安全评估和风险评估的可用性。对于清洁剂成分，人类和环境风险评估项目（HERA）提供了此类风险评估的数据库，美国清洁研究所在其网站上提供了清洁产品成分清单，其中可以找到有关清洁化合物的安全数据。

其他物料的残留风险：

在某些情况下，不属于化学合成一部分的加工化学品可在最终原料药之前在同一生产设备上使用; 在这种情况下，它们可能被视为交叉污染风险(例如原料药生产中的甲醇)。对于化学合成过程中产生的杂质[ ICH Q3A (R2) ，ICH Q3B (R2) ，ICH Q3C (R6)和 ICH Q3D (R1)]有充分的指导意见。

新的要求，污染物清单：

应编制制造产品所涉及的所有可能的化学品、原料药、辅料、中间体、可能的降解剂、清洁剂等的清单。然后应确定所有这些化学品的特征，说明其所带来的危险的类型和程度，并就是否存在重大危险作出决定。

指南还给出HBEL报告的模板！