33种农残检测注意事项
作者：中药人 来自：蒲公英
33种禁用农药多组分残留检测比对15版药典而言，有以下变化难题：
首先不是普通的气相色谱方法，是操作更加复杂，要求更高的质谱检测，中药材（从类别分：根茎、叶、花、果实等，从成份分：挥发油、色素，淀粉等）的基质复杂，农药的品种繁多（33种，55单个）对于质谱的基质干扰各不相同，难以建立通用方法适应全部品种。
其次是15版药典正文药材检测品种四个（甘草、黄芪、人参、西洋参），而33种农残是通法，针对的是所有植物类品种，方法中规定需要每个方法都制备基质对照以绘制标准曲线。这几乎需要每个品种都收集到对应的空白基质。在多少情况下基质效应不能忽略，并且基于浓度与样品不同，倾向于多变化，非常影响检测分析准确性。针对33种禁用农药，要求不得检出（低于定量限），因此对设备而言，灵敏度要求越高，对应的基质干扰越大。
最后33种农残不是简单定量的分析检测，而是标准就在定量限，如果药材农残分析结果高于检出限低于定量限，需要企业对其进行取样、前处理、仪器分析等过程的风险进行评估。
对于目前面临的复杂情况，如何开展33种农残检测，本人汇总了以下检测的注意事项方便各位参考：
提取：
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提取方式 |
优势 |
劣势 |
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直接提取 |
适用性高，溶剂提取效率高，自动化。 |
高油脂样品容易粘连。硬度及纤维性高的须预粉碎，须防止交叉污染。 |
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QuEChERS法 |
操作简单，处理快速，振荡方式可以避免交叉污染。 |
部分样品加水后结块，溶剂与药材的体积变化差异大，导致后提取效果不好，且提取杂质较多，不适用于基质效应过于明显的样品。 |
实际操作过程，加入盐包、NaCL要立即摇散。直接提取法乙腈使用前可以先冰冻，QuEChERS法则是提取后冰冻约30min，再加盐包。直接提取法高速匀浆过程，刀头容易发热，匀浆应避免单次使用过长（可将2min分次操作），使用乙腈润洗，合并溶液，不同样品间应注意多清洗避免交叉污染。
浓缩：全程低于40℃，注意在浓缩过程中旋蒸瓶内溶液液面保持高于旋蒸水面。
净化：
检测方法中各净化材料的应用：
无水硫酸镁：除去药材中的水分。
丙基乙二胺（PSA）：除去极性化合物，如：糖、有机酸、花青素。
十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：除去非极性化合物，如脂类。
硅胶：除去极性较大的杂质，如糖类。
石墨化碳黑（GCB）：除去非极性化合物，主要用于叶类、花类。
HLB：除去部分叶绿素、挥发油、磷脂。
值得注意的是使用石墨化碳黑（GCB）材料净化样品去除色素、挥发油效果明显，但是对于平面结构极性化合物吸附太强，而丙基乙二胺（PSA）同样用于除去样品中的有机酸类。两种材料即对禁用农药中的磺隆类组分产生吸附，都会导致回收率较低，甚至造成假阴性结果，在实际应用中根据药材特性适当减少用量。以液质质目标考虑，优先选择HLB及QuEChERS法。
硅胶、石墨化碳黑（GCB）、十八烷基硅烷键合硅胶（C18）
1.直接提取法：适用于颜色浅、基质效应简单的，例如：、西洋参、人参、枸杞子、山药。
2.QuEChERS法：通用性高，适用于基质效应简单，有少量杂质的，不适合香料及柑橘类植物。
3.固相萃取方式一：适用于基质效应明显，有较多色素、有机酸、糖干扰的，例如：菊花。
4.固相萃取方式二：适用于含有色素、挥发油、糖、有机酸干扰的，例如：甘草。
5.固相萃取方式三：适用于基质复杂，挥发油、色素、有机酸较多的。
值得一提的是选用QuEChERS法因配制混合基质标线原因，需要消耗等同于其他方法6份的空白基质及前处理操作。
实际操作中同一品种的样品在两种仪器可能需要选择不同前处理方法，这需要通过加标回收率实验来决定。
基质效应：在对分析物的浓度或质量进行测定的过程中，处于分析物周围的所有非分析物质对分析物参与反应的影响。即分析物在基质存在的情况下相对于纯溶剂当中的不同相应。
基质效应通常在气质质中表现为基质增强（峰面积增加），在液质质中表现为基质抑制（峰面积减少）。通常基质效应在80~120%之内，可以认为基线效应较小。
内吸磷的同分异构体有两种：硫酮式（Dene ton-O，CAS：298-03-3）、硫醇式（Dene ton-S，CAS：126-75-0），在高温条件下，硫酮式可以转换为硫醇式。
在混标对照品溶液中，硫酮式一般占比70%（S:O=30：70），气质上机时为两个峰，在液质上机时，两者可以合并为一个峰。
整体响应气质干扰较多，液质干扰较少，在两种仪器中推荐采取液质方法。
三氯杀螨醇的同分异构体有两种，o，p’三氯杀螨醇（CAS：10606-46-9）和p，p’三氯杀螨醇（CAS：115-32-2），通常情况下，o，p’三氯杀螨醇含量很低，三氯杀螨醇的合成原料和代谢产物为滴滴涕，存在相互转换的情况。
因此，在仪器分析过程中，如果出现这几个同分异构体组分连续进样峰面积不稳定，应该注意进样口的温度，并且使用高惰性衬管。
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