用于菌群结构谱或宏基因组测序分析的口腔微生物取样方法
一、样本筛选
1、如果受试者存在以下情况，则需剔除。
（1）慢性口干；
（2）牙周袋≥ 4 mm；
（3）未处理的空洞龋病变或者口腔脓肿；
（4）癌前或癌损伤；
（5）念珠菌病；
（6）口臭；
（7）各种原因引起的牙齿缺失 8 颗牙齿以上者；
（8）多于 10%的探诊位点出血。
2、筛选过程需要专业的口腔检测设备及操作方式。
3、详细调查最近的口腔感染、炎症、脓疱、溃疡、良性或者恶性包块等口腔病史。并记录口腔预防或者牙周病治疗的时间长度。
4、完整的软组织检查，包块齿龈、口腔粘膜、舌、咽、扁桃体，并详细记录结果。
5、记录牙齿的数量，受试者应至少有 24 颗牙齿。
6、记录未处理的空洞性龋齿损伤和修复的牙齿的数量。
7、至少 6 项牙周检查，包括mesiofacial, midfacial, distofacial, mesiolingual, midlingual,distolingual.
8、牙周的检查应该包括完整的口腔，探诊深度、探针出血。
二、取样部位
主要包含唾液、软组织部分（舌背部、上颚、口腔粘膜、角质化的牙龈、腭扁桃体、咽喉）、坚硬部分（龈下牙菌斑和龈上的牙菌斑），各部位例图如下：
三、收集方法
1、唾液
（1）要求受试者保持唾液在口中持续至少 1min，然后吐到灭菌后的离心管中，为了保证收集到足够多的唾液（2-5ml），这个过程通常需要重复多次；
（2）唾液的产生可通过咀嚼天然原味口香糖进行刺激（1.0-1.5g）。受试者要有规律地咀嚼，当有足够的唾液时，吐到灭菌的离心管中，之后的步骤与 1 同；
（3）收集好灭菌管后，用自封袋封存，置于冰上，2h 内运输到实验室，-80°保存备用。
注意：在无菌管管盖和管壁上都写上样品名称，样品名称只能用英文字母或阿拉伯数字或两者的组合，而且字符数不小于3且不大于9；下同。
2、软组织样本
所有的软组织样本都用拭子刮取。刮取后，立即在含有 750ul 的 MoBiobuffer 中涡旋。拭子上的海绵应该在离心管壁多按压几次，约 20s，以确保将细菌转移到 buffer 中。然后将buffer 在-80°冷冻保存备用。
（1）舌背部：刮取舌中心1cm2的部位，约 5s；
（2）上颚：刮取整个坚硬的上颚，约10s；
（3）口腔粘膜：刮取左侧和右侧的整个口腔粘膜区，每侧约10s，要注意不要接触到牙齿；
（4）角质化的牙龈：刮取颚前方的牙龈，约10s；
（5）腭扁桃体：分别刮取左侧和右侧的腭扁桃体5s；
（6）咽喉：由于条件反射，这个部位非常难收集，若需要取，建议取完别的部位后再取。慢慢地将拭子放入咽部后方，约 5s。注意不要刮到扁桃体。
3、坚硬部位样本
（1）龈上牙菌斑：记录牙菌斑取自哪颗牙齿，如臼齿，前臼齿，门牙。首先干燥即将取样的部位，其次用 Gracey 刮匙刮取尽可能多的牙菌斑，最后将刮匙浸没到buffer 中，约 4-5s，将刮匙表面的物质都收集到灭菌管中。收集好灭菌管后，用自封袋封存，置于冰上，2h内运输到实验室，-80°保存备用；
（2）龈下牙菌斑：与龈上牙菌斑处理方式相同，需要注意要清除残留的龈上牙菌斑，并注意要丢弃有出血的样本。
四、送样方法
所有样品采集完毕后联系北京微生太科技有限公司取样。微生太将派送干冰到样品所在地，将样品放进派送干冰的泡沫盒，封严后交给物流师傅既可。
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