一种基于蛋白质组学的分离分析外泌体蛋白组份的方法
外泌体是膜包被的纳米囊泡,在细胞之间转运分子信号(例如蛋白质等),并可以从包括人体胎盘在内的各种组织细胞中释放。有趣的是,母体循环中存在的外泌体水平在先兆子痫的孕期中较高,并且其蛋白质含量分布会随着微环境而发生变化。通过寻找备选的生物标志物,利用基于质谱(MS)的蛋白质组学可以更好地解析孕期中相关疾病的病理生理学机制。随着样品制备技术、计算方法学和生物信息学的进步,基于MS的蛋白质组学已经解决了鉴定和定量来自多种复杂生物样品的数千种蛋白质和肽的问题。虽然针对生物标志物诊断领域越来越热,生物基质(例如血浆)的复杂性质也给备选生物标志物的发现和寻找提出了巨大挑战。在这项研究中,来自昆士兰大学的研究人员阐述了一个工作流程——提取用于蛋白质组学分析的外泌体及后续蛋白质组分的分离和分析。
图:在将相同体积的肽样品加入框架的所有孔中后,将高电压施加到框架凝胶的两个末端。电流导致肽分子通过凝胶进行迁移,直到它们迁移到PH等于等电点(pI)的位置。电场也会延伸到悬浮着肽段的液相中。这确保即使在分离电泳运行完成之后,肽段分子仍保持悬浮在各自的等电点的溶液中。所以在准备收集肽段各级组分之前,不要关闭电泳框架的电源。
参考文献:Lai A, Kinhal V, Nuzhat Z, Menon R, Rice GE, Salomon C. (2018) Proteomics Method to Identification of Protein Profiles in Exosomes. Methods Mol Biol1710:139-153.
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