【套路】耀眼的文章都用什么方法分离外泌体！
hzangs 经常被问到的问题无外乎“外泌体分离哪种方法好”“WB检测marker要不要用lysis裂”诸如此类。 今天我们来讨论一下关于“外泌体分离那种方法好”。这个问题其实很难回答，因为这个世界嘛，“屁股决定脑袋”。到底哪个方法好，谁也说不清楚。
你说梯度密度离心加凝胶排阻色谱比较干净，那就会有人说这个方法太复杂，一般人搞不定。你要说PEG沉淀方法分离的所谓“外泌体”里面杂蛋白量太大，又有人会说“你用超离分外泌体，依旧会有杂蛋白”。hzangs不想在这里招埋怨，所以不讨论具体什么方法好。
举一个例子，不知道恰当不恰当，但是hzangs认为是可以说明问题的。假设你研究的基因促进细胞增殖，现在你需要一个抑制剂来抑制细胞增殖从而验证你的基因功能（这也就是我们时常说的rescue实验），面前有两个抑制剂可选：一个是纯度99.9%的抑制剂，0.1%的杂质；一个是纯度只有1%的抑制剂，99%的杂质。两款抑制剂，你选哪一种？ 你敢用1%纯度的抑制剂去做这个实验么？ 请大家把上文中的“抑制剂”换成“外泌体”再读一遍。个人认为，纯点总是好的 o(╯□╰)o
扯远了。哪种分离方法好，谁也说不清楚。但是我们可以看看那些耀眼的大paper都用了什么方法。正巧前段时间汇总了三大顶级期刊的细胞外囊泡相关文章，我们就以CNS上的研究型论文来看看，了解一下耀眼的文章都用了什么方法！
先来看Nature的：
Matusek T, Wendler F, Polès S, et al. The ESCRT machinery regulates the secretion and long-range activity of Hedgehog. Nature. 2014;516(7529):99-103
超速离心
Zhang L, Zhang S, Yao J, et al. Microenvironment-induced PTEN loss by exosomal microRNA primes brain metastasis outgrowth. Nature. 2015;527(7576):100-104
超速离心
Melo SA, Luecke LB, Kahlert C, et al. Glypican-1 identifies cancer exosomes and detects early pancreatic cancer. Nature. 2015;523(7559):177-82
超速离心 PS：估计很多人认为这个paper用的是免疫亲和。其实去好好读读methods就会发现，只有在流式检测的时候作者才用磁珠和已经超离纯化的外泌体进行了孵育。
Hoshino A, Costa-Silva B, Shen TL, et al. Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis. Nature. 2015;527(7578):329-35
超速离心
Votteler J, Ogohara C, Yi S, et al. Designed proteins induce the formation of nanocage-containing extracellular vesicles. Nature. 2016;540(7632):292-295
超速离心
Han CZ, Juncadella IJ, Kinchen JM, et al. Macrophages redirect phagocytosis by non-professional phagocytes and influence inflammation. Nature. 2016;539(7630):570-574
离心 PS：研究对象是微囊泡，离心力2万g以内。
Zhang Y, Kim MS, Jia B, et al. Hypothalamic stem cells control ageing speed partly through exosomal miRNAs. Nature. 2017;548(7665):52-57
超速离心
Kamerkar S, LeBleu VS, Sugimoto H, et al. Exosomes facilitate therapeutic targeting of oncogenic KRAS in pancreatic cancer. Nature. 2017;546(7659):498-503
超速离心
Thomou T, Mori MA, Dreyfuss JM, et al. Adipose-derived circulating miRNAs regulate gene expression in other tissues. Nature. 2017;542(7642):450-455
超速离心
Zhang G, Fang X, Guo X, et al. The oyster genome reveals stress adaptation and complexity of shell formation. Nature. 2012;490(7418):49-54
没找到……
再来看Science的：
Trajkovic K, Hsu C, Chiantia S, et al. Ceramide triggers budding of exosome vesicles into multivesicular endosomes. Science. 2008;319(5867):1244-7
超速离心&蔗糖密度梯度离心
Chu H, Khosravi A, Kusumawardhani IP, et al. Gene-microbiota interactions contribute to the pathogenesis of inflammatory bowel disease. Science. 2016;352(6289):1116-20
超速离心
Bridgeman A, Maelfait J, Davenne T, et al. Viruses transfer the antiviral second messenger cGAMP between cells. Science. 2015;349(6253):1228-32
没找到…… PS：文章涉及外泌体的地方不多……
最后来看Cell的：
Pan BT, Johnstone RM. Fate of the transferrin receptor during maturation of sheep reticulocytes in vitro: selective externalization of the receptor. Cell. 1983;33(3):967-78
超速离心 PS：外泌体研究的老祖宗级文章，找了半天方法，发现里面用的是10万g！
Luga V, Zhang L, Viloria-Petit AM, et al. Exosomes mediate stromal mobilization of autocrine Wnt-PCP signaling in breast cancer cell migration. Cell. 2012;151(7):1542-56
超速离心
Regev-Rudzki N, Wilson DW, Carvalho TG, et al. Cell-cell communication between malaria-infected red blood cells via exosome-like vesicles. Cell. 2013;153(5):1120-33
密度梯度离心
Boelens MC, Wu TJ, Nabet BY, et al. Exosome transfer from stromal to breast cancer cells regulates therapy resistance pathways. Cell. 2014;159(3):499-513
超速离心
Miao Y, Li G, Zhang X, Xu H, Abraham SN. A TRP Channel Senses Lysosome Neutralization by Pathogens to Trigger Their Expulsion. Cell. 2015;161(6):1306-19
免疫亲和
Moroishi T, Hayashi T, Pan WW, et al. The Hippo Pathway Kinases LATS1/2 Suppress Cancer Immunity. Cell. 2016;167(6):1525-1539.e17
超速离心 PS：离心方法略有不同，主要研究EV，离心力比较小。
Nager AR, Goldstein JS, Herranz-Pérez V, et al. An Actin Network Dispatches Ciliary GPCRs into Extracellular Vesicles to Modulate Signaling. Cell. 2017;168(1-2):252-263.e14
超速离心
Szempruch AJ, Sykes SE, Kieft R, et al. Extracellular Vesicles from Trypanosoma brucei Mediate Virulence Factor Transfer and Cause Host Anemia. Cell. 2016;164(1-2):246-257
超速离心 & 蔗糖密度梯度离心 PS：文中没有注明。引用了作者过去的文章，说使用了相同的方法， hzangs查询后发现是离心！
Vanaja SK, Russo AJ, Behl B, et al. Bacterial Outer Membrane Vesicles Mediate Cytosolic Localization of LPS and Caspase-11 Activation. Cell. 2016;165(5):1106-1119
超速离心
Tzipilevich E, Habusha M, Ben-Yehuda S. Acquisition of Phage Sensitivity by Bacteria through Exchange of Phage Receptors. Cell. 2017;168(1-2):186-199.e12
超滤&超速离心
Nabet BY, Qiu Y, Shabason JE, et al. Exosome RNA Unshielding Couples Stromal Activation to Pattern Recognition Receptor Signaling in Cancer. Cell. 2017;170(2):352-366.e13
超速离心
Tassetto M, Kunitomi M, Andino R. Circulating Immune Cells Mediate a Systemic RNAi-Based Adaptive Antiviral Response in Drosophila. Cell. 2017;169(2):314-325.e13
超速离心 & 聚合物沉淀
Ying W, Riopel M, Bandyopadhyay G, et al. Adipose Tissue Macrophage-Derived Exosomal miRNAs Can Modulate In Vivo and In Vitro Insulin Sensitivity. Cell. 2017;171(2):372-384.e12
超速离心
Ashley J, Cordy B, Lucia D, Fradkin LG, Budnik V, Thomson T. Retrovirus-like Gag Protein Arc1 Binds RNA and Traffics across Synaptic Boutons. Cell. 2018;172(1-2):262-274.e11
重水蔗糖垫超速离心
Pastuzyn ED, Day CE, Kearns RB, et al. The Neuronal Gene Arc Encodes a Repurposed Retrotransposon Gag Protein that Mediates Intercellular RNA Transfer. Cell. 2018;172(1-2):275-288.e18
蔗糖密度梯度离心
Zomer A, Maynard C, Verweij FJ, et al. In Vivo imaging reveals extracellular vesicle-mediated phenocopying of metastatic behavior. Cell. 2015;161(5):1046-1057
没找到…… PS：內源产生的囊泡作用于內源细胞，好像确实用不到分离……
汇总完了，hzangs就不进一步统计了，可以看到，除去其中三篇由于hzangs的愚笨没有找到方法的描述，以及一两篇文章中使用了其他的方法，剩余的文章无一例外全部使用了超速离心，hzangs只能说“如果你要发大文章，最好还是跟CNS级别的文章使用的方法保持一致，这样比较稳妥。” 当然，分离方法各有利弊，主要看个人的想法和偏好吧。
如果汇总的内容有错误的地方，还请大家指正。今天就扯到这了吧~
O(*￣—￣*)o 让我们沐浴春风，收获paper~ 大家加油~
编辑：土豆
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