甲基化特异MLPA技术(Methylation-Specific MLPA, MS-MLPA)

甲基化特异MLPA技术(Methylation-Specific MLPA, MS-MLPA)是MLPA技术的一种衍生技术,可用于同时对多个目标的甲基化进行半定量分析。

与常规MLPA探针一样,MS-MLPA探针均由左侧探针和右侧探针组成。除了常规MLPA探针的杂交序列、通用引物识别序列及填充序列之外,MS-MLPA探针还包含甲基化敏感的 HhaI核酸内切酶的酶切位点,可用于甲基化分析

MS-MLPA的基本原理是HhaI酶可以消化未甲基化的靶序列,导致信号降低或无信号;HhaI酶不能消化甲基化的靶序列,产生正常信号。

小胖威利综合征/天使人综合征

可同时检测15q11区域的拷贝数变化及甲基化状态,一次实验即可检测PWS(父源缺失、母源UPD)和AS(母源缺失、父源UPD)。

小胖威利综合征(Prader-Willi syndrome, PWS)和天使人综合征(Angelman syndrome, AS)是不同的神经源性疾病,通常由染色体15q11区域的缺失或单亲二倍体引起,该区域染色体的改变会导致受印迹影响的基因座表达异常。由于父本等位基因的染色体缺失或母本UPD而存在两个印迹拷贝会导致PWS,而缺少相同区域的母本等位基因或父源UPD会导致AS。

Beckwith-Wiedemann综合征/ Russell-Silver综合征

可检测11p15 BWS/RSS区域中IC2(KvDMR)和IC1(H19DMR)结构域的一个或多个序列的异常甲基化,覆盖导致BWS和RSS的大多数原因。还可用于筛选如肾母细胞瘤的儿童期癌症。
Beckwith-Wiedemann综合征(BWS)是一种临床异质性过度生长综合征,与胚胎肿瘤发展风险增加有关。Russell-Silver综合征(RSS)是一种涉及宫内和出生后生长迟缓的遗传异质性疾病。这两种综合征均由染色体11p15上印迹生长调节基因的两个结构域内的遗传或表观遗传改变引起,导致该区域内印迹基因的失调表达。大约60-70%的患者有印迹结构域IC1或IC2的印迹异常。

奥尔布赖特遗传性骨营养不良, 假性甲状旁腺功能减退症

可检测20q13.32 GNAS基因座四个差异甲基化区域的缺失,重复和甲基化异常,包含GNAS,STX16和TH1L(NELFCD)基因。
奥尔布赖特遗传性骨营养不良(Albright hereditary osteodystrophy,AHO)是一种复杂的形态异常和内分泌综合征,其特征是身材矮小,面部圆,肱畸形,皮下骨化和各种程度的神经行为缺陷和发育迟缓。它是由GNAS杂合突变引起的。一些患者存在激素抵抗,主要是甲状旁腺激素,导致低钙血症、高磷血症、高血浆甲状旁腺激素水平和肥胖,其病情被称为假性甲状旁腺功能减退症(PHPIa)。在缺乏激素抵抗的情况下,AHO被称为假性甲状旁腺功能亢进症(PPHP)。除了PHPIa和PPHP外,GNAS位点的突变可能引起PHPIb。母源衍生的突变通常与PHPIa相关,而PPHP由父本衍生的突变引起。PHPIb由GNAS基因座的四个差异甲基化区域中的一个或几个中的缺失或STX16基因中的缺失引起。

脆性X综合征

可同时检测FMR1和AFF2基因的拷贝数及甲基化状态。如果男性DNA样本存在FMR1基因完全突变(>200个三核苷酸重复),FMR1启动子区域就会发生甲基化,该法可以准确地区分FMR1的前突变和全突变。

染色体Xq28上FMR1 (FRAXA)和AFF2 (FMR2, FRAXE)基因的缺失会导致脆性X综合征,其在男性中的发病率为1/1000-1/1500,仅次于先天愚型。FMR1和AFF2基因中最常见的缺陷是外显子1中三核苷酸的重复。这种重复导致基因启动子序列甲基化,从而导致基因沉默。MLPA不能直接检测这种三核苷酸重复片段的长度,但可以定量检测基因启动子序列的甲基化状态,明确基因是否沉默失活。
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