nestin-cre小鼠鉴定问题

下图为JAX实验室的方法，但是我按照这个PCR条件，琼脂糖电泳后没有条带，然后我调整了一下PCR 条件，94℃20s,60℃15s,72℃30s,35个循环，跑出来只有150或者246的单条带，没有246、150两条带出现的情况。

小鼠为杂合子

1）是否我的小鼠基因组提取有问题？此次的DNA浓度为400ng/ul左右

基因组DNA提取：

1)   剪鼠尾0.3-0.5cm到新的离心管，一一对应编号。

2)   每离心管加入200ulPBND+PK2ul, 56度水浴锅过夜。PBND为鼠尾消化液(50mM KCl, 10mM Tris-HCl,                       2.5mM MgCl2,  0.45% (v/v) NP-40 and 0.45% (v/v) Tween-20)，PK为蛋白酶K

3)   95度水浴5min,灭活蛋白酶K平衡至室温，将离心管剧烈振荡，13000rpm，离心15分钟。

4)   取上清到新的离心管，加入等体积的异丙醇，待DNA析出，13000rpm离心10分钟，弃上清。

5)   用预冷的75%乙醇洗涤沉淀一次，1200rpm离心5分钟，将上清全部吸弃。

6)   在超净台中风干约3-5分钟，加入100ul灭菌水，在55℃溶解2小时即可作为PCR模板。

2）我的PCR 条件有问题吗？