番红固绿染色（脱钙骨切片）

番红O（沙黄Safranin O）-固绿（快绿Fast green FCF）染色可以直观反映关节软骨、软骨下骨和骨组织的结构，结果：软骨呈红色，成骨呈绿色。

番红能够对植物的木质化，栓质化和角质化部分进行染色，对细胞核中染色质，染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。固绿能溶于水和酒精，是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂。

方法：

⑴石蜡切片二甲苯脱蜡,经各级酒精下行至水。

⑵ 固绿染液5-10分钟，水洗去多余染液至软骨呈无色。

固绿0.5克，80%酒精100毫升

⑶盐酸酒精快速分化，自来水稍洗。

⑷入番红染液15-30秒

番红1克，70%酒精100毫升

⑸无水乙醇快速脱水3次。

⑹二甲苯透明2~3次共5min分钟，中性树胶封片。

结果：

软骨呈红色或橙红色，背景绿色。

---

改良番红固绿软骨染色

软骨与番红结合成红色，骨与固绿结合成蓝色或绿色

⑴骨组织固定于10%甲醛液或4%多聚甲醛固定2~3天。

⑵二乙胺四乙酸（EDTA）脱钙3~5周（室温25℃）。

⑶水洗几次 去酸

⑷5%硫酸钠水溶液泡12~24小时，中和组织内的酸，水洗

⑸脱水：时间比平常短，进入95%及无水酒精时间更短些

⑹95%酒精后（可进一次无水酒精），入冬青油透明12~24小时，换一次液，经一次二甲苯，浸蜡

95%酒精后，入正丁醇脱水3~4小时（换液2~3次），直接浸蜡

⑺浸蜡温度60~65℃，52~58℃石蜡包埋

⑻切片4~10微米

⑼切片常规脱蜡至水。

⑽入新配的Weigert液染3~5分钟，水洗。

⑾盐酸酒精分色15秒，蒸馏水洗1分钟。

⑿固绿染色5分钟，蒸馏水 1分钟。

⒀入沙黄（番红Safranin O)染1~2分钟，水洗1分钟

⒁酒精 溶液洗多余的固绿1~2分钟，蒸馏水洗1分钟。

⒂95%酒精和无水酒精脱水。

⒃二甲苯透明，树胶封片。