史上最详细教程 | 一文带你精通WB从条带处理到数据分析(上)
准备工具
1.Photoshop 2.Image J
3. SPSS 4. GraphPad Prism 6
如果你拿到的是蓝色的条带,如下图:
那我们就需要变个色,弄成黑白的。然后制作成待发表用的图片。当然有些小伙伴现在用化学发光仪曝光的,WB条带就是黑白的,处理起来就方便一点。
01
去色
文件→打开图片,图像→调整→去色
02
新建画布
文件→新建
画布大小:高度,宽度建议大于10厘米,15厘米都可以,画布建大了没关系,后面可以剪切,建小了不方便操作。
03
复制,粘贴条带
矩形选择工具选择条带,然后快捷键:Ctrl+C,复制所选的条带,Ctrl+V,粘贴到刚才新建的画布上。
04
调整条带大小
我们有时候复制过来的条带不一样大小或者不齐,这个时候我们就需要调整,快捷键:Ctrl+T,拉拽条带至合适大小即可。
05
添加文字标注
条带对齐之后,要给条带做标注。选择横排文字工具。上面菜单栏可以调节字体的大小,字体,颜色。字体我们一般选择Times New Roman,适用于发表的要求。
06
合并图层
让刚才做好的几个图层合并成一张图片。这里先保存一张TIF格式的图片(包含所有图层),方便以后修改。文件→另存为。
调节图片亮度/对比度,可以自己慢慢调整到适当数值,让条带更好看。
(调整前)
(调整后)
07
裁剪图片
注:
1.在合并图层要先保存tif格式的图片,方便以后修改;
2.保存为jpg格式是用于发表用的。
08
Image J
得到了做好的WB图片后要测条带的灰度值,当然Photoshop也可以测量灰度值,我个人觉得用Image J更专业也比较方便。(实际上是我不会,O(∩_∩)O哈哈~)
09
Image J测WB条带灰度值
打开图片:file→open
10
扣除背景影响
Process→Subtract Background
Rolling ball radius:50,light background,让背景变白一点,因为我们的条带是黑的。
11
设置测量参数
Analyze→Set Measurements。勾选Area,mean gray value,min and max gray value,integrated density。
12
设置单位
Analyze→set scale。Unit:pixel。
13
反转条带颜色
edit→invert
14
选择要测量的条带,选好后测量
Analyze→measure,当然你也可以使用快捷键:Ctrl+M。
15
如步骤14测量好之后导出数据
File→save as ,直接默认保存即可。数据结果可以用Excel打开。
下一期再教大家如何用GraphPad Prism 6做WB结果的柱状图,和用SPSS分析WB的统计数据。因为在一期全部做的话,内容太多,图片也多。