Cre重组酶-AAV技术原理

Cre/loxP重组酶系统,指的是条件性基因打靶、诱导性基因打靶、时空特异性基因打靶策略的技术核心,Cre重组酶可以识别LoxP序列并进行重组,在新型基因打靶中获得广泛应用,是由Sternberg和Hamilton提出,应用于小鼠基因工程中的重要工具。

Cre重组酶是1981年从P1噬菌体中发现,属于λ Int酶超基因家族。Cre重组酶基因编码区序列全长1029bp(EMBL数据库登录号X03453),编码由 343 个氨基酸组成的38kDa单体蛋白。它不仅具有催化活性,而且与限制酶相似,能识别特异的 DNA 序列,即 loxP 位点,使 loxP位点间的基因序列被删除或重组。

LoxP(locus of X (cross)-overinP1)序列来源于P1噬菌体,是由两个13bp反向重复序列和中间间隔的8bp序列共同组成,8bp的间隔序列同时也确定了LoxP的方向。Cre在催化DNA链交换过程中与DNA共价结合,13bp的反向重复序列是Cre酶的结合域。

其序列如下:

5′ – ATAACTTCGTATA – GCATACAT – TATACGAAGTTAT – 3′

3′ – TATTGAAGCATAT – CGTATGTA – ATATGCTTCAATA – 5′

AAV-Cre现货特色服务,可以灵活、高效地敲除Gene-floxed小鼠,免去Cre小鼠维系及与Genefloxed小鼠杂交环节每一款现货特色服务都提供完整的质检报告。

特点

70%重组效率。

作用于各种DNA结构,如线形、环状甚至超螺旋 DNA。

介导两个LoxP位点(序列)之间的特异性重组,使LoxP位点间的基因序列被删除或重组。

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