全身性敲除技术原理介绍

基因敲除是研究基因功能的重要方法。传统ES打靶敲除方法，周期长，费用高。CRISPR/Cas9在基因敲除方面的优势：效率高，时间短，24天直接获得基因敲除小鼠。

技术一般的流程

设计合成gRNA→ 显微注射→ 小鼠出生检测。

技术优势或适合应用的研究

-效率高，可达90%的敲除效率，并且有一定纯合敲除比例。

-方便检测，从PCR条带的大小，容易区分是否发生敲除。

-时间短，24天获得基因敲除小鼠。

-不受敲除片段大小限制，从几十bp到Mb长度的DNA,都能有效敲除。

成功案例

图1：两个Grna切割位点之间的~550bp基因序列被敲除，PCR检测，相对于野生带773bp，发生敲除的鼠产生~220bp的条带（箭头指向的条带）。