LSL条件性表达piggyBac载体是什么？

PiggyBac质粒基因表达载体系统利用LoxP-Stop-LoxP（LSL）表达盒，在哺乳动物细胞和动物体内实现Cre介导的条件性基因激活表达。LSL表达盒包含三个重复的SV40 polyA，序列两端为LoxP位点。用户选择的启动子位于LSL表达盒的上游，而用户感兴趣的基因位于其下游。在Cre重组酶不存在的情况下，该表达盒完全阻断了目的基因的正常表达；当将Cre引入携带该载体的细胞中时，目的基因上游的LSL表达盒将会被删除，从而目的基因能够在用户选择的启动子下被永久激活表达。

该载体不仅适用于体外细胞培养，更适用于转基因动物模型的构建。当携带这种载体的转基因动物与携带组织特异性表达Cre的转基因动物杂交时，产生的动物后代将在特定的细胞中组织特异性表达Cre，从而启动目的基因在该特定细胞中组织特异性表达。

在细胞培养中使用该载体系统时，可将抗生素或荧光标记添加到载体中，使转染后的细胞可被筛选或可示踪以便于分离出已永久整合载体的细胞。

PiggyBac系统包含两个载体，一个载体被称为辅助质粒，负责编码转座酶；另一个载体被称为转座子质粒，包含两个末端重复序列（TRs）以及两者之间的被转座区域，用户选择的启动子、表达盒和目的基因一起被克隆到这个转座区域。 当辅助质粒和转座子质粒共转染靶细胞时，辅助质粒产生的转座酶将会识别转座子的两个TR元件，然后将被转座区和两个TR元件插入到宿主基因组中。转座插入通常发生在包含TTAA序列的宿主染色体位点，并在转座子两侧出现TTAA重复序列。

PiggyBac属于II类转座子，通过“剪切—粘贴”的机制移动，从一个地方转座到另一个地方，而不留下序列本身（恰好相反，I类转座子是通过“复制—粘贴”的方式移动）。由于辅助质粒是通过瞬时转染进入宿主细胞的，故会逐渐丢失。随着辅助质粒的丢失，转座子在宿主基因组中变成了永久整合。当这些宿主细胞再次被辅助质粒转染，整合的转座子会再次通过“剪切—粘贴”的机制移动。