CRISPR/Cas9基因脱靶作用

由于CRISPR/Cas9系统简单易用,可以对几乎任意基因进行基因编辑,所以收到广泛欢迎,成为科学研究一种极其重要的工具。它已被迅速而广泛地采用,包括用于人类细胞研究。从根本上说,CRISPR/Cas9系统可以靶定活细胞中的任何基因组区域,并改变遗传信息,这在过去几十年里一直是研究中的圣杯。从根本上说,能够靶定和改变活细胞中的遗传信息,是一个梦想。

但是 CRISPR/Cas9基因编辑系统有潜在的脱靶作用。对指定基因位点进行编辑的同时,可能导致基因组上数个相似位点的突变。为了解决这一问题,Church实验室研究了D10A突变的Cas9蛋白(Cas9Nickase)。Cas9 Nick蛋白与野生型Cas9蛋白不同,Cas9Nickase蛋白结合gRNA后对DNA进行单链切割,产生一个DNA缺口。单独Cas9Nickase产生的缺口产生的缺口一般会被修复,不会产生DNA突变。使用一对gRNA同时对DNA进行切割,可使DNA断裂,从而通过同源重组或者邻端接合产生实现基因敲除。

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