组织学教学切片制作（二） 固定
二、固定
小块组织（1×1×.0.3~0.5厘米）：直接入固定液固定
肺脏：由气管或肺动脉缓慢注射固定液 并切断其静脉，排出血液而使固定液充分渗入。用力均匀，量适当，防止肺泡破裂
肝、肾：从肝动脉、肾动脉注入，切断肝静脉、肾静脉，排出血液并使固定液迅速渗入其内
食管、肠等肌性器官：为防止肌层翻卷收缩 ，将两端结扎 ，从管腔中注射固定液固定4~6小时，再切成小块组织，继续固定神经系统、消化系统、呼吸系统等器官使用整体固定法。由颈总动脉和股动脉等输入，另一端切一静脉血或用塑料导管导血。轮流量：兔、猫，500~1000毫升；猴、狗，1000~2000毫升。
甲醛固定24~48小时，Zenker液24小时左右，Susa液8~12小时。
涂片（如血液涂片、骨髓涂片、细胞涂片）、印片（如淋巴印片）及压片标本：甲醛或锇酸蒸汽1~5分钟（加温45~56℃）
固定温度：10~20℃
柔软组织：先以大块组织固定，稍硬化时再切成小块固定
厚度大于5毫米的组织最好在冰箱内冷藏固定。
（一）固定液：
10%甲醛（福尔马林）：甲醛10毫升，蒸馏水90毫升。
中性甲醛（中性福尔马林）：甲醛（37~40%）100毫升，磷酸二氢钾4克，磷酸氢二钠6.5克，蒸馏水900毫升
弱碱性甲醛：甲醛（37~40%）10毫升，蒸馏水90毫升，碳酸钾或钙、镁适量。
甲醛生理盐水：甲醛10毫升，氯化钠0.9克，蒸馏水90毫升
固定：皮肤色素细胞、小肠潘氏细胞、黏液等，12~24小时
甲醛短时间固定的组织，直接入酒精脱水；长期固定的组织，流水冲洗，甚至经碱酒精去色素。
甲醛酒精 液（FA）：甲醛10毫升，无水酒精80毫升，蒸馏水10毫升
固定：肥大细胞、糖原 、泌尿系统组织，2毫米组织，4~6小时；5毫米以下组织，12~24小时。直接入95%酒精脱水
Bouin液：
苦味酸饱和水溶液（1.22%)75毫升，甲醛（37~40%水溶液）25毫升，冰醋酸5毫升
固定：体皮、头皮、掌皮、指皮、趾皮、肌腱；早期胚胎组织及整装标本。70%酒精洗涤。
Lavdowaky液：
甲醛（37~40%水溶液）5毫升，95%酒精25毫升，冰醋酸1毫升，蒸馏水20毫升
固定：胚胎的神经组织，3~4天。直接由50%酒精脱水
Baker 甲醛钙液：
甲醛（37~40%）10毫升，氯化钙1克，蒸馏水90施工
固定：消化道内分泌细胞、酶（组化）。
甲醛钙镉液：
甲醛（37~40%）10毫升，氯化钙1克，氯化镉1克，蒸馏水90毫升
甲醛蔗糖固定液：
甲醛（37~40%）10毫升，蔗糖7.5克，磷酸盐缓冲液（pH7.4)90毫升
固定：神经组织
Ramon y Cajal固定液：
甲醛（37~40%）10毫升，溴化铵10克，蒸馏水90毫升
固定：神经胶质细胞
甲醛醋酸钙溶液：
甲醛（37~40%）10毫升，醋酸钙2克，蒸馏水90毫升
95%酒精或无水酒精：酒精固定的组织，过度硬化。
肝脏经酒精固定或脱水太久，会使肝组织脆硬
酒精固定后直接经无水酒精脱水，二甲苯透明，最好用香柏油和松节油透明。
Carnoy液：
无水酒精60毫升，氯仿30毫升，冰醋酸10毫升
固定：细胞例、DNA和 RNA、糖原；淋巴组织、腺体。2毫米以下组织2~4小时。无水酒精脱水。
Carnoy-Lebrun液：
无水酒精15毫升，氯仿15毫升，冰醋酸15毫升，加升汞至饱和。
固定：动物学细胞分裂、染色体和中心体。10~30分钟。80~95%酒精冲洗。
Onlmacher液：（用时配制）
无水酒精85毫升，氯仿15毫升，氯化汞20克，冰醋酸5毫升
固定：眼球和内耳。酒精冲洗脱水。
酒精甲醛（AF）液：
95%酒精90毫升，甲醛10毫升
固定：小块组织2~4小时。直接入95%酒精脱水。
Ellerman液：
丙酮90毫升，甲醛（37~40%）10毫升
固定：小块组织，神经纤维。不经水冲洗。
Heidenhain Susa液：
氯化汞4.5克，三氯醋酸2克，氯化钠0.5克，蒸馏水80毫升。用时加甲醛20毫升，冰醋酸4毫升
固定：消化系统、呼吸系统、肌组织。6~12小时。705酒精脱水。
Gilson液：
升汞20克，硝酸（70%）1.7 毫升，冰醋酸0.4毫升，95%酒精7毫升，蒸馏水90毫升
固定：皮肤、纤维软骨、肌腱。2毫米心下组织30分钟至2小时；大块组织12~24小时。直入酒精脱水。
Petrunkewitch液：
升汞15克，硝酸1.7毫升，冰醋酸15毫升，95%酒精35毫升，蒸馏水50毫升
同Gilson液。
Heidenhain Subtrie液
升汞饱和水溶液100毫升，冰醋酸1毫升，三氯醋酸1克。
与Susa液相同。
升汞氯化钠溶液：
升汞4.5克，冰醋酸5毫升，0.9%氯化钠水溶液95毫升
固定：肌肉和腺体。2~6小时。不经水洗，直入酒精脱水。
Apatny液：
升汞4.5克，氯化钠0.5克，50%酒精100毫升
固定：较大志组织2~6小时。直入酒精脱水/
Stieve 液：
升汞饱和水溶液80毫升，冰醋酸5毫升，甲醛（37~405）20毫升
固定：一般组织（嗜酸性颗粒不佳）。
Romeis液
升汞饱和水溶液50毫升，5%三氯醋酸水溶液40毫升，甲醛（37~40%）10毫升
固定：一般组织9特别是胚胎标本和结缔组织较少的器官）。
Zenker液：
重铬酸钾2.5克，升汞5克，硫酸钠1克，蒸馏水100毫升，用时加冰醋酸5毫升
固定：24小时。冲洗24小时，脱汞去碘。
Helly液：
重铬酸钾2.5克，升汞5克，硫酸钠1克，蒸馏水100毫升，用时加冰醋酸5毫升
固定：神经组织、淋巴组织、消化腺、皮下组织
Regaud液
3%重铬酸钾水溶液40毫升，甲醛（37~40%）10毫升
固定：线粒体、嗜铬细胞和神经胶质细胞，固定2~3天后用3%重铬酸钾水溶液固定5~7天，充分水洗。 防止组织硬脆，可加2%甘油。每天换液一次。
Orth液：
2.5%重铬酸钾水溶液90毫升，硫酸钠0.9克，甲醛（37~40%）10毫升
固定：细胞学、神经组织、内分泌系统组织；细胞核染色好。12~24小时。充分水洗。
Altman液：
重铬酸钾0.5克，锇酸0.2克，蒸馏水泵20毫升
固定：细胞质内的微体、脂肪、神经纤维。
Champy液：
3%重铬酸钾水溶液14毫升，1%铬酸水溶液14毫升
固定：线粒体、高尔基复合体。小块组织，6~12小时。铁矾苏木精染色最佳。
Smith液
重铬酸钾0.5克，甲醛（37~40%）10毫升，冰醋酸2.5毫升，蒸馏水87.5毫升
固定：胚胎和女性生殖系统器官组织。24~48小时。8~12小时后换新液。流水冲洗12~24小时。
Navashin液（CRAF）：
1%铬酸水溶液75毫升，甲醛（37~40%）20毫升，醋酸5毫升
固定：胚胎学和细胞学，24~48小时。直入70%酒精脱水，多洗几次。
Randolph改良CRAF液：
A：铬酸1克，冰醋酸7毫升，蒸馏水92毫升
B：甲醛（37~40%）30毫升，蒸馏水70毫升
用时二液等量混合。
固定：内耳、眼球等，12~24小时。
Navashin CRAF液：
| 试剂 | Navashin液 | Billing液 | Billing液 | Radoph液 | Taylov液 |
| 铬酸（克） | 0.75 | 0.67 | 0.67 | 0.5 | 0.4 |
| 醋酸（毫升） | 5 | 6.7 | 6.7 | 3.5 | 2.9 |
| 甲醛（毫升） | 20 | 5 | 13.3 | 15 | 2.4 |
| 蒸馏水（毫升） | 75 | 86.3 | 80 | 81.5 | 94.7 |
柔软疏松组织：Navashin液、Billing液Ⅰ
致密坚硬的组织：Radoph液、Taylov液
常用：Billing液Ⅱ
oldrmith液：
1%铬酸水溶液30毫升，2%重铬酸钾水溶液 8毫升，冰醋酸2毫升
固定：动物胚胎及原生动物，铁苏木精染色最好。4~24小时，冲洗12小时以上。
Flemming液
弱液：铬酸0.25克，锇酸0.1克，蒸馏水100毫升，用时加醋酸0.1毫升
强液：铬酸0.75克，锇酸0.4克，蒸馏水100毫升，用时加醋酸5毫升
固定：小块薄片组织。线粒体、高尔基复合体，脂肪、髓鞘、内耳等。温度不能过低。强液24~48小时，弱液1~5天。流水冲洗24小时 ，50%酒精开始脱水。
Chamberlain液
铬酸1克，冰醋酸2毫升，蒸馏水洗90毫升。用时加1%锇酸水溶液8毫升
固定：细胞学特别是染色体、脂肪和类脂。1毫米大小固定2~4小时；较大组织24小时 。水洗12~24小时。
Maximow液
2%锇酸水溶液2毫升，甲醛（37~40%）2毫升，Zenker液14毫升
固定：细胞学、骨髓切片、嗅黏膜和腺体等。12~24小时，冲洗12~24小时。
Levi液
2%锇酸水溶液4毫升，甲醛（37~40%）4毫升，2.5%重铬酸钾水溶液10毫升，5%升汞水溶液 10毫升。用前混合。
固定：卵巢、子宫、睾丸、肝脏及肾脏等，2~6毫米组织24~72小时，流水 冲洗12~24小时。
Meve液
2% 锇酸水溶液10毫升，铬酸0.25克，1%氯化钠水溶液40毫升，冰醋酸6滴
固定：细胞学微细结构，细胞核、染色体和线粒体。小块组织。4~12小时，流水冲洗4~6小时。
Hermann液
2%锇酸水溶液2毫升，1%氯化铂水溶液20毫升，冰醋酸1毫升
固定：细胞学，细胞分裂和细胞内成型体。12~24小时，流水冲洗12`24小时。铁苏木精染色。
Bouin液：
固定：2~4毫米组织12~24小时，2毫米以下4~6小时。较长时间无妨。人胚、猪胚、鸡胚连续切片和整装片。肝脏、皮肤、胰腺特染。
Bouin氯化钠水溶液：苦味酸饱和水溶液 75毫升，甲醛（37~40%）25毫升，氯化钠1.8克，冰醋酸5毫升
固定：一般组织，特别是较坚硬的组织如皮肤、肌腱、软骨、腺体和消化腺。用法与Bouin液相同。
苦味酸酒精饱和甲醛液
苦味酸5~8克，无水酒精100毫升，甲醛10毫升。充分摇匀
固定：糖原、黏多糖等。4~6小时。直接入无水酒精脱水。
Smith改良Bouin液
苦味酸饱和水溶液45毫升，95%酒精45毫升，甲醛5毫升，冰醋酸5毫升
固定：一般组织，4~18小时。直接入70%酒精脱水。较长固定对组织无大损害。
Allen液
苦味酸饱和水溶液80毫升，甲醛15毫升，冰醋酸5毫升，尿素1克
固定：对细胞的固定比Bouin液好。4~18小时，直接入70%酒精脱水，多换几次酒精。
Rabl液
苦味酸饱和水溶液10毫升，升汞饱和水溶液10毫升，蒸馏水20毫升
固定：胚胎组织和骨发生。4~12小时，50%酒精 洗12~24小时，逐级脱水。
von Rath液
苦味酸饱和水溶液100毫升，2%锇酸水溶液12毫升，10%氯化铂水溶液5毫升，冰醋酸1毫升
固定：一般胚胎和组织，12~24小时。70%酒精换洗几次至淡黄色。
Hubver液：
三氯醋酸15克，升汞5克，95%洒100毫升
固定：一般组织，4~12小时。直入70%酒精脱水。
Hartz液
2%三氯醋酸水溶液4毫升，升汞饱和水溶液76毫升；甲醛（37~40%）20毫升
固定：洋葱根细胞分裂、结缔组织、肌组织，4~12小时，直入70%酒精脱水。
改良混合固定液：
甲醛15毫升，无水酒精50毫升，氯仿30毫升，冰醋酸5毫升
固定：疏松结缔组织、软骨、血管及DNA、RNA、糖原和黏多糖等，6~12小时。直接入酒精脱水。
（二）固定后处理
1 洗涤法
用水冲洗，去掉固定液对组织的作用；除去组织中的固定液。Zenker液、Helly液、Femming液含升汞、重铬酸钾和铬酸的固定液，充分用水冲洗。
用酒精洗涤或直接入酒精 脱水。Bouin液、Carnoy液和FAA液用50%或70%酒精 洗涤 。1：20，12~24小时，换3~6次（4小时换一次）
甲醛固定的组织，对染色无影响，不必冲洗；长期固定于甲酸的组织应充分水洗。
组织冲洗后的保存：①70%酒精；②甘油10毫升，80%酒精90毫升。
2 脱汞
Zenker液、Helly液、Femming液等含升汞的固定液
3 脱钙
骨、牙等硬组织；含几丁质的组织。见脱钙的相关章节。