FVIII基因敲除小鼠模型技术原理

人的FVIII基因位于X染色体上，全长186kb，由26个外显子组成。临床研究表明，血友病A主要是由于FVIII基因的点突变、基因倒置、小段基因的缺失和插入造成的。FVIII基因敲除小鼠是在小鼠胚胎干细胞（SCR012，来源于129S6/SVEV）上以同源重组方式造成内源FVIII基因序列部分缺失（16~19外显子），进而通过四倍体补偿技术获得完全胚胎干细胞来源的FVIII基因敲除小鼠，该小鼠进一步与C57BL/6J小鼠交配育种。

Fig.2 FVIII基因敲除小鼠构建策略示意图；利用ES打靶的技术，用Neo基因替换FVIII基因的16-19外显子。

Fig.3 FVIII基因敲除小鼠基因型鉴定

Fig.4 A. FVIII基因敲除小鼠FVIII活性检测；雄性杂合子（-/y）和雌性纯合子（-/-）小鼠的FVIII活性仅为野生型（wt）小鼠的8%和10%，而雌性杂合子小鼠的活性为野生型小鼠的80%。B. FVIII基因敲除小鼠APTT（凝血活酶时间）检测；雌性杂合子小鼠的APTT时间比野生型小鼠的略有延长，而雄性杂合子（-/y）和雌性纯合子（-/-）小鼠的APTT值均大于120秒。

FVIII基因敲除小鼠是在整体动物水平研究血友病A发病机制和药物筛选的理想动物模型，该小鼠模型具有明确的血友病A症状。饲养时需注意同笼小鼠间争斗可能导致小鼠内出血甚至死亡，剪尾后必须采取及时的止血措施，防止敲除纯合子小鼠失血和死亡。