冷诱导细菌蛋白表达载体是什么?
pCS载体系统是用于在大肠杆菌中低温(通常15℃)高效表达重组蛋白的系统。该载体系统基于大肠杆菌冷休克基因cspA和部分lac操纵子,是pET和pBAD系统(两者是在37℃表达)的补充。
温度与重组蛋白质的折叠有关,从而影响蛋白的溶解度和稳定性。因此,许多在37℃下溶解度和稳定性较差的蛋白,能在较低温度下有所改善。当重组蛋白37°C诱导表达的pET或pBAD载体系统中表达困难时,pCS系统可能是一种非常有用的替代方法。
将目的基因置于pCS载体中cspA启动子、lac操纵子(LacO)和cspA的5'UTR和短翻译增强元件(TEE)的下游。
由于在37℃下5'UTR非常不稳定,cspA启动子在此温度下的转录非常低效。但当将宿主菌转移至15℃时,5'UTR会形成高度稳定的二级结构。TEE序列可以通过核糖体的捕获来增强目的基因的翻译起始。
该质粒还携带有LacI天然启动子和编码序列,LacI蛋白作用于邻近cspA启动子的LacO序列以阻断目的基因的转录。在不存在IPTG的情况下,这种抑制作用可以阻止下游基因的泄漏表达,而加入IPTG则会阻断LacI的抑制作用。IPTG和低温可以有效地诱导目的基因的表达。
赞 (0)