MOPS与MES缓冲液配制方法
吗啉丙磺酸MOPS与吗啉乙磺酸MES是两种生物化学实验中常用的缓冲剂,都可以稳定体系的pH值,两者在化学结构上也十分相近,在缓冲范围上稍有差异,因此配制成缓冲溶液的方法也是大同小异的。
吗啉丙磺酸MOPS性能应用及配制:
MOPSBuffer,即3-吗啉丙磺酸缓冲液,作为生物缓冲剂,缓冲pH范围在6.5~7.9之间,适用于叶绿体薄层备样的电子传递和磷酸化研究;可以配制成多种琼脂培养基,在极限培养基中作为无毒缓冲液应用于棒状链霉菌的培养和头孢菌素的生产;可作为二维凝胶电泳中等电聚焦电泳(IEF)的电解质系统成分;还可应用于RNA印迹杂交,作为核酸RNA分离和转膜时的缓冲液。
吗啉丙磺酸MOPS与吗啉乙磺酸MES
常用的10×MOPSBuffer配制方法如下:
(1)称量41.8gMOPS,溶解于约700mL DEPC处理水中;
(2)使用2NNaOH调节pH值至7.0;
(3)向溶液中加入DEPC处理的1MNaOAc 20mL、0.5MEDTA(pH8.0)20mL;
(4)定容至1L,用0.45um滤膜过滤除去杂质,室温避光保存。使用时稀释10倍浓度即可。
吗啉乙磺酸MES性能应用及配制:
MESBuffer,即2-吗啉乙磺酸,缓冲剂的缓冲范围为pH5.5–6.7,MES缓冲剂的pKa值接近生理pH,应用于活性氨基凝胶层析柱分离脑微管蛋白的流动相成分;MES在通过细胞膜的时候不能被吸收,而且可透过紫外线,这类生物学缓冲液普遍用于植物细胞的培养物中。
配置方法:配置MES缓冲液与其他大多数缓冲区相同。假设配置pH为6,浓度为100mM的MES缓冲液1L:
(1)称量0.1mol或者19.5gMES,溶解于500mLDEPC水中
(2)用1N或者10N的NaOH溶液调节pH至6.0
(3)定容至1L,4°C保存。
综上所述,在选择缓冲液时,不仅要依据所需缓冲范围和缓冲溶液的缓冲能力,还要依据具体的实验内容。除此之外,在生物实验中,还要注意所用到的容器、水和其他添加液的灭菌,以免给实验带来其他的影响因素。