Tet-On诱导表达质粒载体是什么？

Tet-On诱导型基因表达系统是控制哺乳动物细胞中目的基因定时表达的强大工具。Tet-On诱导型基因表达载体作用：当不存在四环素及其类似物（如doxycycline）的情况下，目的基因几乎或完全沉默；当往体系中添加四环素或其他类似物（如doxycycline）时，目的基因得到快速高水平表达。四环素不存在的情况下时，衍生于TeR（Tet抑制蛋白）和KRAB-AB（Kid-1蛋白转录抑制结构域）的融合蛋白tTS结合TRE启动子，导致基因转录抑制。另一方面，四环素存在时，衍生于突变型Ter抑制蛋白和VP16蛋白（转录激活结构域）的融合蛋白rtTA结合TRE启动子，激活基因转录。

除了以tTS和rtTA融合蛋白作为基因转录激活的开关的标准Tet-On载体系统，我们还提供专门为组织特异表达设计低泄露型（Low leak）Tet-On载体系统。这种实验通常要求在靶组织处四环素存在，而非靶组织处无四环素作用。该载体上存在三个表达盒：1. TRE启动子驱动的GOI表达；2. 通用启动子驱动的tTS基因表达；3. 用户自定义启动子驱动的rtTA基因表达。当四环素不存在时，通用启动子驱动tTS在所有组织中表达。tTS结合TRE启动子，导致GOI在所有组织中的转录抑制。四环素存在时，rtTA被在靶组织被转录并结合TRE启动子，从而激活GOI在靶组织中表达。

常规Tet-On质粒载体可以用质粒转染的方式导入多种多样的哺乳动物细胞。在生物医学领域，利用常规转染将质粒载体转到哺乳动物细胞中是使用最广泛的方法。虽然近年来开发了不少更为先进的基因导入载体系统（如慢病毒载体、腺病毒载体、AAV载体和piggyBac等），但常规质粒基因表达载体仍被大多数实验室使用，这主要得益于其在技术上的简便性以及在各种类型细胞中的高效转染率。常规质粒载体转染的关键特点是短暂性，并且在宿主基因组中的整合效率非常低（通常小于1%）。