不同转基因技术的比较

方法显微注射法胚胎干细胞法逆转录病毒法精子介导法优点外源基因整合效率较高，不需要载体，目的基因的长度可达100Kb外源基因整合效率较高，整合在生殖细胞中的比例也很高基因转移效率较高，可在整合点整合转移基因的单个拷贝基因转化方法简单，效率高缺点需要精密的仪器，技术操作较难，易造成宿主动物基因组的插入突变ES细胞株不易建立，长期培养后出现分化现象，产生的转基因动物都是嵌合体插入的基因有大小限度，一般不超过10Kb转入病毒自身的基因表达成功率不高，效果不稳定除了以上几种主流的转基因技术以外，CRISPR/Cas9作为新兴的基因编辑技术，近几年已经被应用于转基因小鼠的构建。自2014年以来，随着cas9技术的日渐成熟，其应用也越来越广泛。而目前最热门且应用最为广泛的CRISPR/Cas9系统，则是以Cas9蛋白和向导RNA为核心组成。Cas9含有在氨基末端的RuvC和蛋白质中部的HNH两个活性位点，在crRNA成熟和双链DNA剪切中发挥作用，可引起DNA双链断裂。当DNA断裂后，细胞核内同时存在与损伤DNA同源的DNA片段，则可通过同源介导的双链DNA修复在目的位点引入外源DNA片段，从而达到片段敲入或编辑的效果。其优点是高效、快捷、简便、成本便宜，且可用于不同物种；缺点是始终有不可预测和不可控的脱靶风险，并且不适用于复杂的基因改造项目。